線性化聚乙烯亞胺PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑是一種高電荷陽離子聚合物，非常容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞中。該轉(zhuǎn)染試劑是一種瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高，在HEK293和CHO等細(xì)胞中基因表達(dá)效率較高。目前已經(jīng)驗(yàn)證線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細(xì)胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細(xì)胞等。該試劑與含血清的培養(yǎng)基兼容，能高效的將核酸導(dǎo)入細(xì)胞。

產(chǎn)品性質(zhì)

 

中文名（Chinese Name）	線性聚乙烯亞胺PEI 25000
英文名（English Name）	Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000
CAS號(hào)（CAS No.）	9002-98-6, 26913-06-4
分子式（Molecular formula）	(CH2CH2NH)n
分子量（Molecular weight）	25,000
外觀（Appearance）	白色至黃色固體
熔點(diǎn)（Melting Point）	73~75 ℃
溶解性（Solubility）	溶于：熱水，低pH的冷水，甲醇和乙醇。不溶于：苯，乙醚和丙酮
結(jié)構(gòu)式（Structure）

運(yùn)輸與保存方法

 

運(yùn)輸方式：室溫運(yùn)輸。
保存方式：粉末在室溫或4 ºC保存，有效期2年。儲(chǔ)存液-20 °C保存，有效期1年；4 °C保存，有效期2周。不可重新凍存。

注意事項(xiàng)

 

1）配置好的PEI溶液從-20 ºC拿出融化后，可放在4 ºC冰箱保存，絕不可重新凍存。

2）對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及通風(fēng)櫥操作。

4）本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于人體。

儲(chǔ)存液配置（1 mg/mL）

 

1.材料

PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級(jí)水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲(chǔ)存瓶。

2. 配置儲(chǔ)存液（1 mg/mL）

1）于1 L玻璃燒杯，將1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q^®超純水或其他相當(dāng)級(jí)別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻，產(chǎn)生小渦。

2）邊攪拌邊滴加入鹽酸（12 mol/L）調(diào)節(jié)pH，直至pH＜2.0。

3）蓋上燒杯頂部并攪拌3小時(shí)至完全溶解；整個(gè)過程要保持pH＜2.0。

【注】：可能會(huì)存在一些小纖維狀顆粒不能溶解，這是正常現(xiàn)象。

4）邊攪拌邊滴加入NaOH（10 mol/L）調(diào)節(jié)pH，直至到6.9 ~7.1。

5）將溶液轉(zhuǎn)入量筒內(nèi)，并加水定容到1 L。

6）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲(chǔ)存液。

7）根據(jù)需要分裝并儲(chǔ)存在-20 °C，1年穩(wěn)定。

【注】：儲(chǔ)存液再次融化后，可置于4 °C保存，2周穩(wěn)定，但絕不可重新凍存。

轉(zhuǎn)染操作流程（以6孔板為例）

 

1.接種細(xì)胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在 70%~80%為宜。

2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：按照以下體系配制DNA-PEI核酸-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物： 

1）對(duì)于每孔細(xì)胞，使用100 μL無血清培養(yǎng)基稀釋2 μg目的DNA ，充分混勻成 DNA稀釋液。

【注】：無血清稀釋液建議采用 Opti-MEM或ddH₂O

2）立刻向100 μL的DNA稀釋液中加入5 μL的PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑，旋渦10秒，充分混勻。

3）在室溫下孵育10~25 min，使得形成DNA-PEI陽離子核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物。

3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：

1）在形成復(fù)合物過程中，移除細(xì)胞生長培養(yǎng)基，每孔中加入2 mL新鮮預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。

2）直接將100 μL DNA-PEI核酸-PEI復(fù)合物加入細(xì)胞中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。

3）37 ℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后最快7 h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間。

4.穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選（可選）

轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上），37 ℃，5% CO₂培養(yǎng)箱孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：

培養(yǎng)皿	表面積（cm2）	DNA的量（μg）	轉(zhuǎn)染試劑的量（μL）	稀釋液體積（μL）	培養(yǎng)基總量
96孔板	0.3	0.1	0.1	10	100 μL
48孔板	0.7	0.2	0.3	20	200 μL
24孔板	1.9	0.5	1	50	500 μL
12孔板	3.8	1	2	50	1mL
6孔板	10	2	4	100	2 mL
25cm2培養(yǎng)瓶	21	4	8	200	4 mL
75cm2培養(yǎng)瓶	58	10	20	500	10 mL

 

HB240731