產(chǎn)品簡介

 

PEI 40000是一種分子量為40000的高電荷陽離子聚合物，容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成復(fù)合物，并使該復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞中。PEI 40000是一種瞬時轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染效率高，在HEK293和CHO等細(xì)胞中基因表達(dá)效率較高。目前已經(jīng)驗(yàn)證線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣泛適用于多種細(xì)胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細(xì)胞等，轉(zhuǎn)染效率高達(dá)80%~90%。

PEI 40000與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比，具有很多優(yōu)點(diǎn)。包括：1. PEI 40000較易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性；2. PEI 40000操作簡便，更易于使用，且比PEI 25000的轉(zhuǎn)染效果好；3. PEI 25000含有4-11%的丙?；鶜埩?，其能阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合。相較于PEI 25000，PEI 40000是完全脫落的結(jié)構(gòu)，因此其性能始終高效如一。

本產(chǎn)品為速溶型，溶解迅速，配制方便。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	40816ES01 / 40816ES02/ 40816ES03
規(guī)格	5 mg / 100 mg / 1 g
中文名（Chinese Name）	線性聚乙烯亞胺PEI 40000
英文名（English Name）	Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000
CAS號（CAS No.）	49553-93-7
分子式（Molecular formula）	(CH2CH2NH)n
分子量（Molecular weight）	40,000
外觀（Appearance）	白色至灰白色固體
溶解性（Solubility）	溶于水，不溶于有機(jī)溶劑：苯，乙醚和丙酮
結(jié)構(gòu)式（Structure）

 

組分信息

 

組分名稱	40816ES01	40816ES02	40816ES03
Hieff Trans®Polyethylenimine Linear(PEI) MW40000（rapid lysis） 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑（速溶型）MW40000	5 mg	100 mg	1g

 

儲存條件

 

室溫密封保存，有效期2年。儲存液在4 ºC保存，有效期3個月。

 

使用說明

 

儲存液配置（1 mg/mL）

1）材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、1 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。

2）配置儲存液（1 mg/mL）

1. 于1 L玻璃燒杯，將1 g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當(dāng)級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻。
2. 待PEI 40000完全溶解（通常不到5 mins）。
3. 用氫氧化鈉(1 mol/L)溶液調(diào)節(jié)pH為6.80 - 6.90。
4. 將溶液轉(zhuǎn)入量筒內(nèi)，并加水定容到1 L。
5. 用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液。
6. 根據(jù)需要分裝并儲存在4 °C，3個月穩(wěn)定。

 

1.貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作流程（以6孔板為例）

1）接種細(xì)胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在70%~80%為宜。

2）準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：按照以下體系配制DNA-PEI核酸-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：

1. 對于每孔細(xì)胞，使用100 μL無血清培養(yǎng)基稀釋2 μg目的DNA，充分混勻成DNA稀釋液。
2. 立刻向100 μL的DNA稀釋液中加入4 μL的PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。
3. 在室溫下孵育10~15 min，使得形成DNA-PEI陽離子核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物。

3）轉(zhuǎn)染細(xì)胞：

1. 在形成復(fù)合物過程中，移除細(xì)胞生長培養(yǎng)基，每孔中加入2 mL新鮮預(yù)熱的完全培養(yǎng)基。
2. 直接將100 μL DNA-PEI核酸-PEI復(fù)合物加入細(xì)胞中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。
3. 37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后最快5 h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請自行確定適合檢測時間。

 

不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：

培養(yǎng)皿	表面積（cm2）	DNA的量（μg）	轉(zhuǎn)染試劑的量（μL）	稀釋液體積（μL）	培養(yǎng)基總量
96孔板	0.3	0.1	0.1	10	100 μL
48孔板	0.7	0.2	0.3	20	200 μL
24孔板	1.9	0.5	1	50	500 μL
12孔板	3.8	1	2	50	1mL
6孔板	10	2	4	100	2 mL
25cm2培養(yǎng)瓶	21	4	8	200	4 mL
75cm2培養(yǎng)瓶	58	10	20	500	10 mL

【注】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。

2.懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作流程（1L體系為例）

1）接種細(xì)胞

根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議細(xì)胞接種密度為1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為2-3×10⁶ cells/mL為宜。

2）準(zhǔn)備DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

1. 質(zhì)粒與試劑比例：建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:0.5 - 1:3。
2. 質(zhì)粒稀釋：使用50 mL無血清培養(yǎng)基稀釋2 mg質(zhì)粒，并輕輕混勻。
3. 試劑稀釋：使用50 mL無血清培養(yǎng)基稀釋4 mL 轉(zhuǎn)染試劑，并輕輕混勻。
4. 配置復(fù)合物：將配置好的轉(zhuǎn)染試劑稀釋液加入到質(zhì)粒稀釋液中，輕輕渦旋混勻后，室溫靜置10-20 mins，備用。

 

3）轉(zhuǎn)染細(xì)胞

1. 直接將配置好的DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物加入到1L細(xì)胞懸液中，搖動培養(yǎng)瓶，輕輕混勻。
2. 在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-72h后進(jìn)行檢測分析。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本品為鹽酸鹽形式的聚乙烯亞胺，具有易結(jié)塊傾向。

2. 對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20241023