產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了熱啟動因子，極大提高了擴增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增速度達到15 sec/kb，擴增目的片段的長度可長達10 kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶適用于復雜模板的擴增。擴增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
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編號 |
組分 |
產(chǎn)品編碼/規(guī)格 |
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10148ES10 （10U） |
10148ES60 （100U） |
10148ES76 （500U） |
10148ES80 （1000U） |
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10148-A |
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) |
5 μL |
50 μL |
250 μL |
250 μL×2 |
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10148-B |
2×Canace® Gold PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
300 μL |
1 mL×3 |
1 mL×15 |
1 mL×30 |
產(chǎn)品應用
基因克?。粡碗sDNA模板擴增；高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦PCR反應體系（冰上配制）
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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2×Canace® Gold PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
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DNA模板 |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL?？梢栽?.5-2 U/50 μL之間進行優(yōu)化，請勿超過2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應體系中。
4）Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴增。
6）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
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模板種類 |
擴增片段1 kb-10 kb |
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基因組DNA |
50ng-200 ng |
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質粒或病毒DNA |
10pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序
兩步法程序（優(yōu)先推薦）：
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
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變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
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終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
三步法程序（常規(guī)程序）：
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
預變性 |
98℃ |
3 min |
1 |
|
變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
退火 |
60℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
30 sec/kb |
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終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
梯度溫度退火程序（難擴增基因推薦程序）:
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步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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循環(huán)步驟 |
循環(huán)步驟 |
循環(huán)步驟 |
1 |
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預變性 |
預變性 |
預變性 |
15，每個循環(huán)降低1℃ |
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變性 |
變性 |
變性 |
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退火 |
退火 |
退火 |
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延伸 |
延伸 |
延伸 |
20 |
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終延伸 |
終延伸 |
終延伸 |
|
|
循環(huán)步驟 |
循環(huán)步驟 |
循環(huán)步驟 |
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預變性 |
預變性 |
預變性 |
1 |
【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦溫度：98℃，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦溫度：72℃。時間：30 sec/kb，復雜模板根據(jù)實際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴增產(chǎn)物：請將PCR擴增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產(chǎn)物。擴增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴增程序下的特點：
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程序類型 |
兩步法 |
三步法 |
梯度退火 |
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速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
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特異性 |
高 |
中等 |
高 |
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PCR產(chǎn)量 |
中等 |
最高 |
中等 |
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檢出率 |
高 |
中等 |
高 |
相關產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10149ES03/08 |
1/5 mL |
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10909ES20 |
20 T |
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10910ES20 |
20 T |
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10911ES20 |
20 T |
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10912ES10 |
10 T |
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11003ES10 |
10 T |
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11004ES10 |
10 T |
HB210923
