概述
 

神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell)是指存在于神經(jīng)系統(tǒng)中，具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的潛能，從而能夠產(chǎn)生大量腦細(xì)胞組織，并能進(jìn)行自我更新，并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞群。

在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)中B-27與N-2添加劑的使用十分廣泛，N-2添加劑主要被用于神經(jīng)母細(xì)胞瘤以及周圍神經(jīng)系統(tǒng)（PNS）與中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）來源的有絲分裂后期的神經(jīng)元的生長(zhǎng)和表達(dá)。
 

圖1. 神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)展

神經(jīng)系統(tǒng)疾病及治療機(jī)理
 

神經(jīng)系統(tǒng)疾病是指發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的以感覺、意識(shí)、運(yùn)動(dòng)等障礙為主要表現(xiàn)的疾病。包括帕金森病、阿爾茨海默病、卒中、肌萎縮性側(cè)索硬化癥（漸凍癥）、多發(fā)性硬化癥、亨廷頓病、小腦萎縮、脊髓損傷、外傷性腦損傷等。

神經(jīng)干細(xì)胞的治療機(jī)理是：（i）患病部位組織損傷后釋放各種趨化因子，可以吸引神經(jīng)干細(xì)胞聚集到損傷部位，并在局部微環(huán)境的作用下分化為不同種類的細(xì)胞，修復(fù)及補(bǔ)充損傷的神經(jīng)細(xì)胞。由于缺血、缺氧導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞的損傷，使局部通透性增加，另外在多種黏附分子的作用下，神經(jīng)干細(xì)胞可以透過血腦屏障，高濃度的聚集在損傷部位；（ii）神經(jīng)干細(xì)胞可以分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)損傷細(xì)胞的修復(fù)；（iii）神經(jīng)干細(xì)胞可以增強(qiáng)神經(jīng)突觸之間的聯(lián)系，建立新的神經(jīng)環(huán)路。
 

N-2添加劑的分類
 

1、動(dòng)物源N-2
動(dòng)物源成分：直接來源于動(dòng)物或間接來源于動(dòng)物的成分，如牛肉膏、牛血清、人白蛋白、人免疫球蛋白、豬胰島素、胰蛋白酶等，這些動(dòng)物源成分的異源蛋白在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中可能會(huì)引發(fā)人和動(dòng)物的異體排斥或者過敏反應(yīng)。N-2中的胰島素成分為牛胰島素。

2、無動(dòng)物源N-2
無動(dòng)物源成分：接觸的所有成分均不含任何動(dòng)物成分，無動(dòng)物源性產(chǎn)品可規(guī)避動(dòng)物成分相關(guān)外源制劑帶來的安全風(fēng)險(xiǎn)。N-2中的胰島素成分為重組人胰島素。
非動(dòng)物源性N-2可更好的幫助下游iPSC客戶進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)研究。

 

N-2添加劑的應(yīng)用
 

1、膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞

星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多功能膠質(zhì)細(xì)胞，參與構(gòu)成大腦的物理結(jié)構(gòu)，具有支持神經(jīng)細(xì)胞、維持神經(jīng)元周圍離子濃度、免疫調(diào)節(jié)等重要作用。膠質(zhì)前體細(xì)胞 (GPC)，也稱為膠質(zhì)限制性祖細(xì)胞 (GRP) 或少突膠質(zhì)祖細(xì)胞(OPC)，是具有分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞潛力的細(xì)胞。GPC群體來源于組織或通過分化從多能細(xì)胞產(chǎn)生，這是由外源性應(yīng)?因?誘導(dǎo)的。在這里，我們描述了?種可以調(diào)整以利于分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞或少突膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)系統(tǒng)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1）培養(yǎng)基配制

培養(yǎng)基組分	添加量（mL）
DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，1X	97
N-2無血清添加劑	1
胎牛血清	2

2）實(shí)驗(yàn)流程

 

圖2. 膠質(zhì)前體細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)流程圖

 

2、?質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)

星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中最豐富的膠質(zhì)細(xì)胞類型，負(fù)責(zé)支持皮層回路活動(dòng)所需的一系列功能，包括神經(jīng)遞質(zhì)再攝取、維持離子穩(wěn)態(tài)以及參與突觸形成和消除。同時(shí)，神經(jīng)元對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞參與層特異的分子發(fā)育調(diào)控具有支持補(bǔ)充作用。神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細(xì)胞作為神經(jīng)系統(tǒng)功能單位，它們之間的相互作用在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中非常重要，參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)從胚胎發(fā)生到老化的各個(gè)活動(dòng)，貫穿了神經(jīng)元的整個(gè)發(fā)育過程。

實(shí)驗(yàn)步驟

1）培養(yǎng)基的配制

培養(yǎng)基組分	添加量（mL）
DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，1X	88
N-2無血清添加劑	1
胎牛血清	10
青霉素-鏈霉素	1
可選擇添加：EGF（制備為100 μg/mL原液）	0.02

【注】表皮生長(zhǎng)因子(EGF)也可以添加，以增強(qiáng)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖。

2）實(shí)驗(yàn)流程

 

圖3. ?質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)流程圖

 

名詞小貼士：

神經(jīng)（Nerve），是由聚集成束的神經(jīng)纖維所構(gòu)成。 而神經(jīng)纖維本身是由多個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞構(gòu)成，其神經(jīng)元的構(gòu)造為軸突外并被神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞所形成的髓鞘包覆。 如此神經(jīng)能將訊息從動(dòng)物身體一處傳遞到另外一處，使動(dòng)物能協(xié)調(diào)指揮動(dòng)作與進(jìn)行各種工作。

神經(jīng)元（neuron），又名神經(jīng)原或神經(jīng)細(xì)胞，是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能單位之一。人腦中，神經(jīng)細(xì)胞約有860億個(gè)。

神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs），是自我更新的多能細(xì)胞，可分化為神經(jīng)系統(tǒng)的主要表型。這些細(xì)胞類型包括神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。

神經(jīng)祖細(xì)胞（NPC），是干細(xì)胞分裂的后代，其通常在體內(nèi)經(jīng)歷有限數(shù)量的復(fù)制循環(huán)。大腦中有許多“專業(yè)的”細(xì)胞，比如神經(jīng)細(xì)胞，少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)細(xì)胞傳遞和接受信息。少突膠質(zhì)細(xì)胞包裹著神經(jīng)細(xì)胞，為神經(jīng)細(xì)胞更快地傳遞信息提供幫助。星形膠質(zhì)細(xì)胞(星形細(xì)胞)通過提供營(yíng)養(yǎng)和從身體的其他部位調(diào)節(jié)進(jìn)入大腦來支持神經(jīng)系統(tǒng)。

 

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1、高效培養(yǎng)，質(zhì)量?jī)?yōu)良；

2、質(zhì)控嚴(yán)格，嚴(yán)格無菌、無內(nèi)毒素；

3、批次穩(wěn)定，批間差異??；

4、貨期迅速，現(xiàn)貨供應(yīng)；

5、選擇多樣，動(dòng)物源與非動(dòng)物源。

試劑訂購(gòu)
 

培養(yǎng)基及添加劑

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
NSC-27 supplement, serum free, 50X 無血清 NSC-27 添加劑	60703ES	10 mL
NSC-27 supplement without Vitamin A, serum free, 50X 無血清 NSC-27 添加劑,去除維生素A	60704ES	10 mL
NSC-27 supplement without Antioxidant, serum free, 50X 無血清 NSC-27 添加劑,無抗氧化劑	60705ES	10 mL
N-2 supplement,serum free,100X N-2無血清添加 劑，100×	60706ES	5 mL
NSC-27 supplement, serum free, 50X(animal origin-free)無血清 NSC-27 添加劑(非動(dòng)物源)	60711ES	10 mL
NSC-27 supplement without Vitamin A, serum free, 50X(animal origin-free) 無血清 NSC-27 添加劑,去除維生素A(非動(dòng)物源）	60712ES	10 mL
N-2 supplement,serum free,100X N-2無血清添加劑,100X(非動(dòng)物源）	60713ES	5 mL
HEPES Free Acid 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)	60110ES	100 g/500 g
L-alanyl-L-glutamine solution，200mM L-丙氨 酰-L-谷氨酰胺，200mM	60701ES	20 mL/100 mL/500 mL
Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture 細(xì)胞培養(yǎng)用青霉素-鏈霉素（雙抗）	60162ES	100 mL
Ceturegel™ Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠	40183ES	5 mL/10 mL
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free基質(zhì)膠（等同于matrigel基質(zhì)膠）	40190ES08/10	5mL/10mL

 

小分子化合物（抑制劑/激活劑）

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Y-27632	53006ES	1 mg/5 mg/10 mg
MK-2206 2HCl	53008ES	1 mg/5 mg/10 mg
GDC-0068(Ipatasertib; RG7440; GDC0068)	53009ES	1 mg/5 mg/10 mg
Dorsomorphin dihydrochloride  (Dorsomorphin 2HCl)	53010ES	1 mg/5 mg/10 mg
Y-27632 dihydrochloride	52604ES	5 mg/10 mg/25 mg

細(xì)胞因子

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Recombinant Human DKK-1	92275ES	20 μg/100 μg/500 μg
Recombinant Human EGF	92701ES	100 μg/500 μg
Recombinant Human bFGF	91330ES	10 μg/100 μg/500 μg
Recombinant Human GDNF	92102ES	10 μg/100 μg/500 μg
Recombinant Human Noggin	92528ES	5 μg/100 μg/500 μg
Recombinant Human BDNF	92129ES	5 μg/20 μg/100 μg