產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Cas9核酸酶是一種向?qū)?/font>RNA（guide RNA, gRNA）引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，可催化雙鏈DNA的裂解。NLS-Cas9-EGFP在Cas9核酸酶的基礎(chǔ)上進(jìn)行改造，它在N端包含一個核定位信號(NLS)，在C端包含一個EGFP和一個6X (His)序列。當(dāng)Cas9以NLS序列表達(dá)時，Cas9 RNP復(fù)合物在進(jìn)入細(xì)胞后立即定位到細(xì)胞核。不需要體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯，提高了效率。此外，與其他系統(tǒng)相比，EGFP標(biāo)簽可作為追蹤或分類轉(zhuǎn)染細(xì)胞的報告器，通過熒光激活細(xì)胞分選(FACS)富集所需基因組編輯的細(xì)胞群。它大大降低了在基因組編輯應(yīng)用中與單細(xì)胞克隆和基因分型相關(guān)的人工和成本。
產(chǎn)品特點如下：
無DNA：沒有外部DNA添加；
高切割效率：NLS 確保 Cas9 蛋白高效進(jìn)入細(xì)胞核 ；
低脫靶效應(yīng)：Cas9 核酸酶的瞬時表達(dá)提高了切割的特異性；
節(jié)省時間：無需轉(zhuǎn)錄和翻譯；
減少勞動力：通過基于EGFP的FACS富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。C端His標(biāo)簽增加了融合蛋白檢測方法的選擇。
可應(yīng)用于：
通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。
通過電穿孔或注射與特定 gRNA 結(jié)合時的體內(nèi)基因編輯。
通過基于 EGFP 的 FACS 富集細(xì)胞群以進(jìn)行所需的基因組編輯。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
11364ES50 / 11364ES60 / 11364ES76 |
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規(guī)格 |
50 μg / 100 μg / 500 μg |
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來源 |
重組Cas9來源于大腸桿菌 |
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物種 |
化膿性鏈球菌 |
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標(biāo)簽 |
EGFP，His |
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分子量 |
190 KDa |
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濃度 |
1 mg/mL（50 μg）；3 mg/mL（100 μg）；3 mg/mL（500 μg） |
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反應(yīng)溫度 |
37℃ |
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溶劑 |
10 mM Tris，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH7.4 |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
11364ES50 |
11364ES60 |
11364ES76 |
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11364-A |
NLS-Cas9-EGFP Nuclease |
50 μg（1 mg/mL） |
100 μg（3 mg/mL） |
500 μg（3 mg/mL） |
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11364-B |
10X Reaction Buffer |
1.5 mL |
1.5 mL |
1.5 mL |
注：10X Reaction Buffer 配方：200 mM HEPES, 1 M NaCl, 50 mM MgCl2, 1 mM EDTA, pH 6.5 at 25°C
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
體外DNA裂解實驗推薦反應(yīng)體系
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組分 |
20 μL反應(yīng)體系 |
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10×Reaction Buffer |
2 μL |
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Substrate DNA |
2 μL（80 ng/μL） |
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NLS-Cas9-EGFP Nuclease |
2 μL-4 μL（25 ng/μL） |
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sgRNA |
2 μL（50 ng/μL） |
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Nuclease-free water |
To 20 μL |
注意：
- 溶液應(yīng)充分混合，在37℃孵育1-2 h，然后加入1 μL的蛋白酶K（20 μg/μL），在55℃孵30 min孵育結(jié)束后，用瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。
- 此反應(yīng)條件僅為推薦量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建議1:2-1:5之間進(jìn)行摸索。
- 設(shè)計3-6條sgRNA，篩選效率最高的sgRNA。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230320
