Cas9核酸酶是一種guide RNA引導(dǎo)的內(nèi)切酶，可以催化雙鏈DNA的裂解。這種靶向核酸酶是一種高精度的基因組編輯的有力工具。Cas9蛋白與CRISPR/Cas9系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA（gRNA）成分形成一個(gè)非常穩(wěn)定的核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物。Cas9 RNP復(fù)合物可以在進(jìn)入細(xì)胞后，通過添加一個(gè)核定位信號(hào)（NLS），立即定位到細(xì)胞核。YEASEN開發(fā)了NLS-Cas9-NLS核酸酶，該酶在蛋白的兩端包含一個(gè)核定位序列（NLS），以增加入核切割效率。另外，與其他系統(tǒng)相比，Cas9 RNP復(fù)合物可以迅速從細(xì)胞中清除，最大限度地減少了脫靶切割的機(jī)會(huì)。這種無DNA的系統(tǒng)避免了將外源DNA插入基因組的風(fēng)險(xiǎn)，這對(duì)于基于基因編輯的疾病治療非常有用。

產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

無DNA：沒有外部DNA添加。

高切割效率：雙端NLS定位確保Cas9蛋白高效進(jìn)入細(xì)胞核 。

低脫靶效應(yīng)：Cas9 核酸酶的瞬時(shí)表達(dá)提高了切割的特異性。

節(jié)省時(shí)間：無需轉(zhuǎn)錄和翻譯。

可應(yīng)用于：通過體外DNA切割篩選高效和特異性靶向gRNA。

通過電穿孔或注射與特定 gRNA 結(jié)合時(shí)的體內(nèi)基因編輯。

 

產(chǎn)品信息

貨號(hào)	11362ES60/ 11362ES76
規(guī)格	100 μg / 500 μg
來源	重組Cas9來源于大腸桿菌
物種	化膿性鏈球菌
標(biāo)簽	His
濃度	4 mg/mL（100 μg）；4 mg/mL（500 μg）
反應(yīng)溫度	37℃
溶劑	10 mM Tris，300 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50%甘油，pH7.4 at 25°C

 

組分信息

組分編號(hào)	組分名稱	11362S60	11362S76
11362-A	NLS-Cas9-NLS Nuclease	100 μg（4 mg/mL）	500 μg（4 mg/mL）
11362-B	10X Reaction Buffer	1.5 mL	1.5 mL

注：10X Reaction Buffer 配方：200 mM HEPES, 1 M NaCl, 50 mM MgCl₂, 1 mM EDTA, pH 6.5 at 25°C

 

儲(chǔ)存條件

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

體外DNA裂解實(shí)驗(yàn)推薦反應(yīng)體系

組分	20 μL反應(yīng)體系
10×Reaction Buffer	2 μL
Substrate DNA	2 μL（80 ng/μL）
NLS-Cas9-NLS Nuclease	2 μL-4 μL（25 ng/μL）
sgRNA	2 μL（50 ng/μL）
Nuclease-free water	To 20 μL

注意：

1. 溶液應(yīng)充分混合，在37℃孵育1 h-2 h，然后加入1μL的蛋白酶K（20 μg/μL），在55℃孵30 min孵育結(jié)束后，用瓊脂糖凝膠電泳檢測消化效率。
2. 此反應(yīng)條件僅為推薦量，Cas9 : sgRNA的比例，一般建議1:2-1:5之間進(jìn)行摸索。
3. 設(shè)計(jì)3-6條sgRNA，篩選效率最高的sgRNA。

切割效率參考示意圖：

按上表所述，20 μL的反應(yīng)體系，在含有線性化質(zhì)粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反應(yīng)緩沖液中在37°C下反應(yīng)1小時(shí)，在瓊脂糖凝膠電泳測定結(jié)果顯示，線性化質(zhì)粒的消化效率為97.37%，遠(yuǎn)高于90%。

 

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230323