Hieff Unicon? Fast Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus) 快速RT-qPCR探針法試劑盒(含UDG)
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff Unicon®Fast Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)是以RNA為模板進(jìn)行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡化了實(shí)驗(yàn)操作，本產(chǎn)品含有UDG酶，可有效防止氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的MP Buffer，Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠保證引物擴(kuò)增效率的同時，進(jìn)行多達(dá)四重的反應(yīng)。
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
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13660ES60 (100 T) |
13660ES80 (1000 T) |
13660ES92 (10000 T) |
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13660-A |
4×HU® MP Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13660-B |
HU® Enzyme Mix (UDG plus) |
200 μL |
2×1 mL |
20 mL |
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13660-C |
RNase Free H2O |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
【注】
a. 4×HU® MP Buffer為Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的簡寫。本組分含有dNTP和dUTP
b. HU® Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase、RNAse inhibitor、UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase和UDG酶。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20°C儲存，有效期1年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。
反應(yīng)體系
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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4×HU® MP Buffer |
6 |
1× |
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HU® Enzyme Mix (UDG plus) |
2 |
- |
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Primer Mix (10 μM) |
1 |
0.4 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
0.5 |
0.2 μM |
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模板RNA |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
a. 引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.4 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進(jìn)行調(diào)整。
b. 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。
c. 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
d. 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。
e. 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
適用機(jī)型
需添加High Rox適用機(jī)型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™
需添加Low Rox 適用機(jī)型： ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
不需要Rox校正的儀器型號：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
常規(guī)擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
逆轉(zhuǎn)錄 |
50°Ca |
10 min |
1 |
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預(yù)變性 |
95°C |
5 min |
1 |
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擴(kuò)增反應(yīng) |
95°C |
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45 |
|
60°Cb |
30 secc |
快速擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
|
逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃ |
2 min |
1 |
|
預(yù)變性 |
95℃ |
2 sec |
1 |
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擴(kuò)增反應(yīng) |
95℃ |
|
42 |
|
60℃a |
13 secb |
【注】
a. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。
b. 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)最短時間限制進(jìn)行設(shè)置。
注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
HB221229
