產(chǎn)品簡介

 

Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以 RNA 為模板進(jìn)行多重定量 PCR 反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量 PCR 在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。

本試劑盒利用耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一鏈 cDNA，并利用 UNICON® HotStart Taq DNA

Polymerase 進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的 MP Buffer，Enzymes Mix 等，緩沖液中已含有 Mg²⁺ 和 dNTPs, 以及有效抑制非特異性 PCR 擴(kuò)增的因子和提升多重 qPCR 反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠在保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)。此外，該預(yù)混液添加了 dUTP/UDG 系統(tǒng)，可有效防止氣溶膠污染。

組分編號(hào)	組分名稱	13650ES50 (50 T)	13650ES60 (100 T)	13650ES80 (1000 T)	13650ES92 (10000 T)
13650-A	2×Hifair® V C58P2 MP Buffer	750 μL	1.5 mL	15 mL	150 mL
13650-B	Hifair® V C58P2 Enzyme Mix	60 μL	120 μL	1.2 mL	12 mL

 

組分信息

 

【注】1. 2×Hifair® V C58P2 MP Buffer 為Hifair® V C58P2 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的簡寫,其中包含dNTPs,dUTP, Mg²⁺ , stabilizers等。

2. Hifair® V C58P2 Enzyme Mix 主要包含有耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase, UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, RNase inhibitor, UDGase。

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期18個(gè)月。

 

使用說明

 

1. 反應(yīng)體系（以30 μL為例）

組分	體積（μL）	終濃度
2×Hifair® V C58P2 MP Buffer	15	1×
Hifair® V C58P2 Enzyme Mix	1.2	-
Primer/Probe Mix (2.5 μM)	3	0.25 μM
模板RNA	1-10	-
RNase Free H2O	to 30	-

【注】使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

1. 引物探針混合液濃度：Primer/Probe Mix 中包含多對(duì)引物和探針，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整；探針終濃度也可以根據(jù)對(duì)熒光曲線和熒光增峰的要求在 0.05-0.5 μM 范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。
2. 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
3. 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。

2. 參考擴(kuò)增程序

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
逆轉(zhuǎn)錄	50℃a	20 min	1
預(yù)變性	95℃	5 min	1
擴(kuò)增反應(yīng)	95℃	15 sec	40-45 cycles
	60℃b	30 secc

【注】a. 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者55℃均可。

b. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。

c. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。

3. 適用機(jī)型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.

 

注意事項(xiàng)

 

1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20241108