Hieff NGS^® 384 CDI Primer for Illumina^®是Illumina^®高通量測(cè)序平臺(tái)DNA文庫(kù)構(gòu)建專(zhuān)用接頭引物試劑盒，共分為2個(gè)Set，每個(gè)Set包含二代測(cè)序建庫(kù)中使用的PE adapter以及 8種i5 Index Primer和12種i7 Index Primer。 2個(gè)Set共提供16種i5 Index Primer和24種i7 Index Primer，配合 Yeasen出品的DNA建庫(kù)試劑盒使用可構(gòu)建多達(dá)384種不同組合的雙端index標(biāo)記的文庫(kù)。試劑盒中提供的所有試劑都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫(kù)構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

產(chǎn)品組分

編號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格
12412ES02	PE Adapter	2×336 μL
	P 501-508	60 μL each
	P 701-712	40 μL each
12413ES02	PE Adapter	2×336 μL
	P 509-516	60 μL each
	P 713-724	40 μL each

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。

所有組分-20°C保存，有效期18個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1）本試劑盒中PE Adapter的濃度為15 μM，單個(gè)文庫(kù)構(gòu)建的接頭使用量根據(jù)所用建庫(kù)試劑盒進(jìn)行調(diào)整。Index Primer的濃度為25 μM。

2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得完整的文庫(kù)。Index Primer提供Barcode序列標(biāo)簽，用于高通量測(cè)序時(shí)區(qū)分樣品。

3）本試劑盒每個(gè)Set包含8種i5 Index Primer (P 5xx)和12種i7 Index Primer (P 7xx)，相互組合可以構(gòu)建96種不同組合的雙端Index標(biāo)記文庫(kù)。2個(gè)Set共提供16種i5 Index Primer和24種i7 Index Primer。您可以使用Cat#12412中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）與Cat#12413中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）組合用以構(gòu)建多達(dá)384種不同組合的雙端Index標(biāo)記文庫(kù)。

4）切勿加熱接頭，應(yīng)在室溫讓其緩慢溶解，實(shí)驗(yàn)室溫度最好設(shè)置為20-25℃。接頭避免反復(fù)凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4℃。

5）使用Hieff NGS^® 384 CDI Primer for Illumina^®試劑盒構(gòu)建的測(cè)序文庫(kù)結(jié)構(gòu)如下：

  

6）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
7）本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1. 接頭的使用：參照所用建庫(kù)說(shuō)明書(shū)中對(duì)不同投入量的推薦用量稀釋至合適濃度使用。

2. Index Primer的使用：按照建庫(kù)說(shuō)明書(shū)中文庫(kù)擴(kuò)增體系配制反應(yīng)體系（如下表），反應(yīng)程序按照建庫(kù)說(shuō)明書(shū)中程序進(jìn)行設(shè)置。

組分名稱(chēng)	體積（μL）
2× High Fidelity DNA PCR Mix	25
P 5xx	2.5
P 7xx	2.5
Adapter Ligated DNA	20
Total	50

序列信息

PE Adapter for Illumina：

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

i5 Index Primer for Illumina：

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

i7 Index Primer for Illumina：

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物對(duì)應(yīng)的Index名稱(chēng)、引物中包含的Index序列以及測(cè)序時(shí)對(duì)應(yīng)的Index序列信息如下表所示：

 

I5 Index Primers	引物中的序列	Sample Sheet輸入/測(cè)序時(shí)Index序列
		NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500	NovaSeq 6000 v1.5 reagents， MiniSeq, NextSeq, HiSeq 3000/4000
P501	TATAGCCT	TATAGCCT	AGGCTATA
P502	ATAGAGGC	ATAGAGGC	GCCTCTAT
P503	CCTATCCT	CCTATCCT	AGGATAGG
P504	GGCTCTGA	GGCTCTGA	TCAGAGCC
P505	AGGCGAAG	AGGCGAAG	CTTCGCCT
P506	TAATCTTA	TAATCTTA	TAAGATTA
P507	CAGGACGT	CAGGACGT	ACGTCCTG
P508	GTACTGAC	GTACTGAC	GTCAGTAC
P509	GACCTGTA	GACCTGTA	TACAGGTC
P510	ATGTAACT	ATGTAACT	AGTTACAT
P511	GTTTCAGA	GTTTCAGA	TCTGAAAC
P512	CACAGGAT	CACAGGAT	ATCCTGTG
P513	TAGCTGCC	TAGCTGCC	GGCAGCTA
P514	AGCGAATG	AGCGAATG	CATTCGCT
P515	TATGCTGC	TATGCTGC	GCAGCATA
P516	AGAAGACT	AGAAGACT	AGTCTTCT

 

I7 Index Primers	引物中的序列	Sample Sheet輸入/測(cè)序時(shí)Index序列
P701	CGAGTAAT	ATTACTCG
P702	TCTCCGGA	TCCGGAGA
P703	AATGAGCG	CGCTCATT
P704	GGAATCTC	GAGATTCC
P705	TTCTGAAT	ATTCAGAA
P706	ACGAATTC	GAATTCGT
P707	AGCTTCAG	CTGAAGCT
P708	GCGCATTA	TAATGCGC
P709	CATAGCCG	CGGCTATG
P710	TTCGCGGA	TCCGCGAA
P711	GCGCGAGA	TCTCGCGC
P712	CTATCGCT	AGCGATAG
P713	CCTACACG	CGTGTAGG
P714	GTAGTGTC	GACACTAC
P715	TGTATGCA	TGCATACA
P716	CCAGACTG	CAGTCTGG
P717	AGGTGCCA	TGGCACCT
P718	TCACCTTG	CAAGGTGA
P719	GTATCTTT	AAAGATAC
P720	CAGCTCCA	TGGAGCTG
P721	TCGCCTTA	TAAGGCGA
P722	CTAGTACG	CGTACTAG
P723	AGCGTAGC	GCTACGCT
P724	GAGCCTCG	CGAGGCTC

 

HB210118