產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®是Illumina®高通量測序平臺RNA文庫構(gòu)建專用接頭引物試劑盒，共分為2個(gè)Set，每個(gè)Set包含二代測序建庫中使用的PE adapter以及 8種i5 Index Primer和12種i7 Index Primer。 2個(gè)Set共提供16種i5 Index Primer和24種i7 Index Primer，配合 Yeasen出品的RNA建庫試劑盒使用可構(gòu)建多達(dá)384種不同組合的雙端index標(biāo)記的文庫。試劑盒中提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
產(chǎn)品組分
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編號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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12414ES02 |
PE Adapter |
320 μL |
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RP 501-508 |
60 μL each |
|
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RP 701-712 |
40 μL each |
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12415ES02 |
PE Adapter |
320 μL |
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RP 509-516 |
60 μL each |
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RP 713-724 |
40 μL each |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
所有組分-20°C保存，有效期18個(gè)月。
注意事項(xiàng)
1）本試劑盒中PE Adapter的濃度為15 μM，單個(gè)文庫構(gòu)建的接頭使用量根據(jù)所用建庫試劑盒的推薦用量進(jìn)行調(diào)整。 Index Primer的濃度為10 μM。
2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過PCR擴(kuò)增獲得完整的文庫。Index Primer提供Barcode序列標(biāo)簽，用于高通量測序時(shí)區(qū)分樣品。
3）本試劑盒每個(gè)Set包含8種i5 Index Primer (RP 5xx)和12種i7 Index Primer (RP 7xx)，互相組合可以構(gòu)建96種不同組合的雙端Index標(biāo)記文庫。2個(gè)Set共提供16種i5 Index Primer和24種i7 Index Primer。您可以使用Cat#12414中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）與Cat#12415中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）組合用以構(gòu)建多達(dá)384種不同組合的雙端Index標(biāo)記文庫。
4）切勿加熱接頭，應(yīng)在室溫讓其緩慢溶解，實(shí)驗(yàn)室溫度最好設(shè)置為20-25℃。接頭避免反復(fù)凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4℃。
5）使用Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®試劑盒構(gòu)建的測序文庫結(jié)構(gòu)如下：
6）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
7）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 接頭的使用：參照所用建庫說明書中對不同投入量的推薦用量稀釋至合適濃度使用。
2. Index Primer的使用：按照建庫說明書中文庫擴(kuò)增體系配制反應(yīng)體系（如下表），反應(yīng)程序按照建庫說明書中程序進(jìn)行設(shè)置。
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組分名稱 |
體積（μL） |
|
2× High Fidelity DNA PCR Mix |
25 |
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RP 5xx |
2.5 |
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RP 7xx |
2.5 |
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Adapter Ligated DNA |
20 |
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Total |
50 |
序列信息
PE Adapter for Illumina：
5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´
5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´
i5 Index Primer for Illumina：
5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´
i7 Index Primer for Illumina：
5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´
[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物對應(yīng)的Index名稱、引物中包含的Index序列以及測序時(shí)對應(yīng)的Index序列信息如下表所示：
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I5 Index Primers |
引物中的序列 |
Sample Sheet輸入/測序時(shí)Index序列 |
|
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NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500 |
NovaSeq 6000 v1.5 reagents， MiniSeq, NextSeq, |
||
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RP501 |
TATAGCCT |
TATAGCCT |
AGGCTATA |
|
RP502 |
ATAGAGGC |
ATAGAGGC |
GCCTCTAT |
|
RP503 |
CCTATCCT |
CCTATCCT |
AGGATAGG |
|
RP504 |
GGCTCTGA |
GGCTCTGA |
TCAGAGCC |
|
RP505 |
AGGCGAAG |
AGGCGAAG |
CTTCGCCT |
|
RP506 |
TAATCTTA |
TAATCTTA |
TAAGATTA |
|
RP507 |
CAGGACGT |
CAGGACGT |
ACGTCCTG |
|
RP508 |
GTACTGAC |
GTACTGAC |
GTCAGTAC |
|
RP509 |
GACCTGTA |
GACCTGTA |
TACAGGTC |
|
RP510 |
ATGTAACT |
ATGTAACT |
AGTTACAT |
|
RP511 |
GTTTCAGA |
GTTTCAGA |
TCTGAAAC |
|
RP512 |
CACAGGAT |
CACAGGAT |
ATCCTGTG |
|
RP513 |
TAGCTGCC |
TAGCTGCC |
GGCAGCTA |
|
RP514 |
AGCGAATG |
AGCGAATG |
CATTCGCT |
|
RP515 |
TATGCTGC |
TATGCTGC |
GCAGCATA |
|
RP516 |
AGAAGACT |
AGAAGACT |
AGTCTTCT |
|
I7 Index Primers |
引物中的序列 |
Sample Sheet輸入/測序時(shí)Index序列 |
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RP701 |
CGAGTAAT |
ATTACTCG |
|
RP702 |
TCTCCGGA |
TCCGGAGA |
|
RP703 |
AATGAGCG |
CGCTCATT |
|
RP704 |
GGAATCTC |
GAGATTCC |
|
RP705 |
TTCTGAAT |
ATTCAGAA |
|
RP706 |
ACGAATTC |
GAATTCGT |
|
RP707 |
AGCTTCAG |
CTGAAGCT |
|
RP708 |
GCGCATTA |
TAATGCGC |
|
RP709 |
CATAGCCG |
CGGCTATG |
|
RP710 |
TTCGCGGA |
TCCGCGAA |
|
RP711 |
GCGCGAGA |
TCTCGCGC |
|
RP712 |
CTATCGCT |
AGCGATAG |
|
RP713 |
CCTACACG |
CGTGTAGG |
|
RP714 |
GTAGTGTC |
GACACTAC |
|
RP715 |
TGTATGCA |
TGCATACA |
|
RP716 |
CCAGACTG |
CAGTCTGG |
|
RP717 |
AGGTGCCA |
TGGCACCT |
|
RP718 |
TCACCTTG |
CAAGGTGA |
|
RP719 |
GTATCTTT |
AAAGATAC |
|
RP720 |
CAGCTCCA |
TGGAGCTG |
|
RP721 |
TCGCCTTA |
TAAGGCGA |
|
RP722 |
CTAGTACG |
CGTACTAG |
|
RP723 |
AGCGTAGC |
GCTACGCT |
|
RP724 |
GAGCCTCG |
CGAGGCTC |
HB210118
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