什么是X-α-Gal
 

X-α-Gal是一種酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的顯色底物，用于在培養(yǎng)基上直接檢測(cè)GAL4系統(tǒng)的酵母雙雜交作用。通過(guò)藍(lán)白顏色篩選，快速和簡(jiǎn)便地識(shí)別陽(yáng)性的藍(lán)色克隆，無(wú)需費(fèi)時(shí)的β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測(cè)。

X-α-Gal檢測(cè)酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)的一個(gè)報(bào)告基因，編碼分泌型的α-半乳糖苷酶。該酶可水解無(wú)色的X-α-Gal底物并最終產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。表達(dá)α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培養(yǎng)基上顯藍(lán)色，即陽(yáng)性的雙雜交作用。X-α-Gal可用來(lái)區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同物種以及劃分乳酸菌和雙歧桿菌。組織學(xué)研究中，X-α-Gal還可借助光學(xué)顯微鏡來(lái)檢測(cè)組織的α-半乳糖苷酶活性。

X-α-Gal在酵母雙雜交中的應(yīng)用

圖片來(lái)源：維基百科

完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4從結(jié)構(gòu)上以及功能上可以劃分成相對(duì)獨(dú)立的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（BD）和DNA轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（AD）。其中BD可以識(shí)別并結(jié)合GALA的上游激活序列UAS，而AD與BD相互靠近并結(jié)合會(huì)招募轉(zhuǎn)錄因子，從而促進(jìn)下游轉(zhuǎn)錄機(jī)制的進(jìn)行。在酵母雙雜交系統(tǒng)中， 表達(dá)“誘餌”（bait）蛋白的cDNA構(gòu)建到含BD的載體中，表達(dá)BD-bait融合蛋白，表達(dá)“獵物”（prey）蛋白的cDNA構(gòu)建至含AD載體中，表達(dá)AD-prey融合蛋白。如果bait與prey蛋白之間有相互作用并能形成蛋白-蛋白復(fù)合物，可使AD和BD彼此靠近，從而激活下游轉(zhuǎn)錄機(jī)制的進(jìn)行。通過(guò)檢測(cè)報(bào)告基因表達(dá)與否，可以獲取蛋白質(zhì)間相互作用的有效信息。顯色反應(yīng)常常作為報(bào)告基因表達(dá)與否的檢測(cè)方式，當(dāng)MEL1作為報(bào)告基因時(shí)，表達(dá)的α-半乳糖苷酶，可使X-α-Gal顯色底物變藍(lán)。

X-α-Gal與X-gal的不同

X-Gal是β-半乳糖苷酶(LacZ)的反應(yīng)底物，在β-半乳糖苷酶的催化下會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，常需要配合IPTG使用用于藍(lán)白斑篩選。而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反應(yīng)底物。X-α-gal用作酵母雙雜交系統(tǒng)中藍(lán)白篩選的篩選標(biāo)記。二者不可以互相替換。

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