核酸質控作為分子生物學最基礎的實驗之一，核酸定量的準確與否直接決定著下游實驗的結果。目前市面上在用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit熒光染料法。
紫外光吸收法利用分光光度計測定260nm處的吸光度，對DNA和RNA進行定量。與此同時，還能通過計算OD260/OD280估計核酸的純度，但檢測數(shù)值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機化合物)的影響。
Qubit熒光染料法利用熒光染料特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA或蛋白質相結合，并在特定波長光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，并不受樣本中可能存在的其他雜質分子影響，熒光強度與樣品中的靶分子濃度相對應。
表1.核酸定量主流方法比較
紫外吸收法與qubit熒光法定量各有優(yōu)勢，互相配合。針對常規(guī)核酸樣本初步定量濃度純度和是否存在污染物等信息可選擇吸光度法定量，Qubit定量更適合低濃度的珍貴樣品或需要精確定量的下游實驗，如二代測序、熒光定量PCR等。
翌圣已推出多款Qubit定量產(chǎn)品：dsDNA HS Assay Kit for Qubit®（Cat#12640）、預混即用型1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®(Cat#12642）、單鏈DNA定量試劑盒ssDNA Assay Kit for Qubit®（Cat#12645）和dsDNA BR Assay Kit（Cat#12643），自上市以來廣受好評。
即用型dsDNA定量預混液--1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®
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操作簡便：即用型預混液，無需預混；
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高靈敏度：檢測濃度低至50 pg/μL；
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穩(wěn)定性好：熒光信號持續(xù)3 h，常溫放置20 d不影響定量準確性；
A. 超強穩(wěn)定性：室溫存放2周仍保持穩(wěn)定（測定值與理論值偏差<10%）
表2.對比競品，不同樣本4℃和室溫穩(wěn)定性測試
B. 靈敏度高，批間穩(wěn)定性良好
表3.不同批次穩(wěn)定性測試
寬范圍dsDNA定量--dsDNA BR Assay Kit
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高靈敏度：檢測濃度低至50 pg/μL；
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線性關系表現(xiàn)佳：2-1000 ng范圍內，線性關系良好
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污染物耐受性強：可耐受常見污染物。
表4.對比競品，標準品穩(wěn)定性和耐受污染物測試
ssDNA定量的理想之選——高性價比ssDNA Assay Kit for Qubit®
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高靈敏度：檢測濃度低至50 pg/μL；
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線性關系表現(xiàn)佳：0-200 ng范圍內，線性關系良好；
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信號穩(wěn)定：優(yōu)異的染料加上升級優(yōu)化的Buffer，可室溫下維持穩(wěn)定的熒光強度，在常見污染，如鹽、自由核苷酸、溶劑、去污劑或蛋白質等環(huán)境下仍有很強的適用性，定量準確；
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穩(wěn)定性好：4℃、25℃處理6個月，性能無明顯變化；
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應用范圍廣：使用操作流程簡單，實現(xiàn)寡聚核苷酸、引物、變性DNA、單鏈環(huán)狀DNA等的快速定量。
A. 重復性好：在不同的Qubit儀器中進行定量，不同類型的樣品使用翌圣多個批次的Cat#12645測試。0-200ng范圍內，不同Qubit儀器測量重復性好。
圖1.不同批次在不同qubit儀器穩(wěn)定性測試
B.穩(wěn)定性良好：標準品和1×工作液穩(wěn)定性測試，37℃放置10天，熒光信號穩(wěn)定。長期穩(wěn)定性監(jiān)測25℃儲存6個月，產(chǎn)品性能于4℃對照一致。
表5. 標準品和待測樣本穩(wěn)定性測試
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定量準確：檢測試劑擴增效率高，特異性好，在0.0002 pM～20 pM范圍內均有很好的線性關系；
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儀器兼容性廣：兼容常規(guī)定量平臺，如Bioer平臺、Bio-Rad平臺和ABI 7500平臺；
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穩(wěn)定性好：4℃、25℃處理6個月，性能無明顯變化。
圖2.不同廠家文庫定量試劑定量情況
翌圣定量產(chǎn)品經(jīng)過嚴格的出廠質控標準，保證穩(wěn)定準確定量，讓您定量無憂！
表6. 翌圣NGS定量產(chǎn)品選擇指南
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產(chǎn)品類別 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
定量范圍 |
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dsDNA HS |
dsDNA HS Assay Kit for Qubit® |
0.2-100 ng； 10 pg/µL-100 ng/µL |
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Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 雙鏈DNA（dsDNA）定量試劑 |
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1×dsDNA HS Assay Kit |
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dsDNA BR |
dsDNA BR Assay Kit |
2-1000 ng； 0.1 ng/µL-1000 ng/µL |
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ssDNA qubit |
ssDNA Assay Kit for Qubit® |
1–200ng； 50 pg/μL-200 ng/μL |
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qPCR法文庫定量 |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, qPCR Master Mix |
12302ES |
定量預混液 |
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Hieff NGS® Library Dilution Buffer |
12303ES |
文庫稀釋液 |
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Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, DNA Standard (1-6) |
12307ES |
定量標準品 |
