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            Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 雙鏈DNA(dsDNA)定量試劑
             
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            產品說明書
                  
            FAQ
                  
            COA
                  
            已發(fā)表文獻
                  
             
            qubit試劑搭配酶標儀操作流程
            


            產品描述
            


            Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，其僅在與DNA雙鏈結合后才發(fā)出熒光，且所產生的熒光與DNA濃度呈正比，因而可用于精確測量多個來源的dsDNA，包括基因組DNA、病毒DNA、PCR擴增產物、測序文庫等。
            


            本產品Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：①靈敏度高：可檢測低至200 pg的dsDNA，節(jié)省寶貴樣品；②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA。④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。
            


             
            


            運輸和保存方法
            


            室溫運輸。-20℃避光密封保存，有效期2年。
            


             
            


            注意事項
            


            1. Picogreen定量試劑含有DMSO（已知有毒試劑），請小心操作；
            


            2. 盡管目前尚未有數(shù)據(jù)表明Picogreen具有誘變性和毒性，但是該試劑能結合雙鏈DNA，請操作時務必小心；
            


            3. 為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和戴一次性手套。
            


            4. 本產品僅用作科研用途！
            


             
            


            應用實例
            


            【注】：本方法參照2010《中國藥典》進行操作。
            


            1．染料工作液的配置
            


            PicoGreen dsDNA定量試劑取出后回溫至室溫，該試劑是以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的。實驗當天，根據(jù)實驗用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀釋PicoGreen濃縮液。
            


            【注】：1）由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
            


            2）PicoGreen試劑見光易降解，所以應將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。
            


            3）溶液最好在配制好數(shù)小時內使用，以保證最佳結果。
            


            2．標準品工作液的配制
            


            取λDNA標準品，用無菌TE buffer配制成100 μg/mL的標準品工作液。
            


            【注】：標準品也可用其他已知濃度的純化DNA；有一些產品描述可使用小牛胸腺DNA作為標準品，按照我們實際操作經驗，并不推薦它作為標準品。
            


             
            


            3．標準品工作液稀釋
            


            1) 母液稀釋：使用TE緩沖液將100 μg/mL的標準品稀釋為2 μg/mL。
            


            2) 梯度稀釋：參照表1，對DNA標品母液進行梯度稀釋。
            


            表1 標曲制作
            


            
	
		
            
			
			
            TE體積（μL）
            
			            		
			
			
            2 μg∕mL DNA標準品母液（μL）
            
			            		
			
			
            Picogreen染料工作液（μL）
            
			            		
			
			
            DNA標準品終濃度
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            0
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            1 μg/mL
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            900
            
			            		
			
			
            100
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            100 ng/mL
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            990
            
			            		
			
			
            10
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            10 ng/mL
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            999
            
			            		
			
			
            1
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            1 ng/mL
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            0
            
			            		
			
			
            1,000
            
			            		
			
			
            Blank
            
			            		
		
            
	            

            


             
            


            3) 標準曲線的制備：向經稀釋的各梯度標準品溶液中加入1 mL染料工作液混勻，避光室溫孵育5 min。使用酶標儀或熒光計檢測熒光強度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；將溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，確信不要在樣品中引入氣泡；以1×TE緩沖液空白對照，測定標準品熒光值；用標準品溶液的濃度（ng/mL）對應的熒光強度作直線回歸，制備標準曲線。
            


            4) 測量剩余樣品的熒光值：熒光計將給出一個直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來產生DNA濃度的標準曲線。
            


            HB220615
            


             
            

               
             
             
             
             
             
             
             
            400-6111-883