本產(chǎn)品是用大腸桿菌重組表達(dá)來源于噬菌體改造后耐熱的T7 RNA聚合酶，本品是以含有T7啟動子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，在50-52℃條件下，合成與啟動子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板，因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		14807ES90 (5,000 U)	14807ES96 (25,000 U)
14807-A	Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	100 μL	500 μL
14807-B	10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer (NTP Free)	500 μL	5 mL

【注】：10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer中含40 mM MgCl₂和100 mM DTT，但不含有NTP，如需請購買本公司NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 100 mM each) (Cat#10133)。

 

活性定義

在 50℃、pH8.0 的條件下，1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [³H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。

 

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸，-25~-15℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

1、DNA模板的種類：推薦使用含T7啟動子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。

2、轉(zhuǎn)錄模板的純度會顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在質(zhì)粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量。通過酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板；PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。

3、在20 μL反應(yīng)體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶可顯著提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。

4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

反應(yīng)體系

組分	加入量	終濃度
10 × Thermostable T7 RNAP Reaction Buffer	2 μL	1×
模板DNA	0.2-1μg	-
NTP Set Solution (ATP, CTP, UTP, GTP, 10 mM each)	1 μL each	0.5 mM each
Thermostable T7 RNA Polymerase (50 U/μL)	2 μL	-
RNase inhibitor (40 U/μL)	0.5 μL	1 U/μL
RNase free ddH2O	up to 20 μL	-

 

50℃孵育1 h。

【注】：1. 建議選用Yeasen 公司NTP Set Solution(Cat# 10133)稀釋至10倍至10 mM濃度使用，RNase inhibitor 推薦（Cat# 10621）。

              2. DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。

     3. Buffer和水建議放置到室溫，然后開始使用，反應(yīng)于室溫下配制，防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。

     4. 確保所有試劑及耗材無RNase殘留。

 

HB230216