Geldex 75 PG以高交聯(lián)度瓊脂糖為骨架，以交聯(lián)葡聚糖為填充，兼具葡聚糖的高選擇性和瓊脂糖的物理性能，分辨率高、硬度大、流速快，柱床隨緩沖液濃度變化小，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，非特異性吸附低，回收率高，易于放大，是精細純化階段的良好選擇。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	高度交聯(lián)的瓊脂糖和葡聚糖
分離范圍	0.5-30 kDa (線性蛋白)，3-70 kDa (球蛋白)
粒徑	24-44 µm
最大耐壓	0.3 MPa
最大流速	100 cm/h
使用流速	30-50 cm/h
PH穩(wěn)定性	3~12 (工作)，1~14 (CIP，短期)
化學(xué)穩(wěn)定性	0.2 M NaOH、8 M尿素、6 M 鹽酸胍、30%異丙醇、1%SDS、 30%乙腈
滅菌	0.5 M NaOH 2 h，或者121℃ 30 min
儲存緩沖液	20%乙醇，4~30℃

 

運輸和保存方法

1.使用后的Geldex 75 PG應(yīng)儲存于 20%乙醇中，為了防止乙醇揮發(fā)以及微生物生長，建議3個月更換一次新鮮的20%乙醇。

2.放置在4~8℃冷庫中保存效果更好；有效期5年。

 

注意事項

1.凍結(jié)可能破壞介質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)。 

2.裝柱前最好將介質(zhì)懸液平衡到室溫。

3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4.本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1 裝柱

1.1 層析柱裝填

1）根據(jù)層析柱的體積計算需要的 Geldex 介質(zhì)的量：需要的沉降體積=柱體積×1.15（即壓縮比為1.15）。

2）置換溶液，將膠懸液倒入布氏漏斗，抽去液體，并用約3倍體積的蒸餾水洗滌，（當體積比較大或者條件不具備的時候也可以采用待膠分層后抽去上層溶液，再加入適量蒸餾水攪勻，等到分層后抽去，反復(fù)3次的方法置換介質(zhì)溶液）

3）膠懸液準備，加入沉降膠體積的二分之一到一倍的蒸餾水（可以加入0.1%的 Tween20可以提高裝柱的效果）攪勻備用。

4）取清洗干凈的 YXK 層析柱（YXK 系列層析柱的直徑從1 cm到 45 cm的不同規(guī)格可以滿足不同規(guī)模大小的層析應(yīng)用），排凈柱底膜氣泡，并在柱子底部保留1 cm高左右的水柱，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

5）將攪勻后的膠懸液一次緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時使用裝柱器），注意不要帶入氣泡，倒入后用塑料棒再次攪勻。

6）將上柱頭連接到層析系統(tǒng)或者蠕動泵，排凈上柱頭篩網(wǎng)下面的氣泡（對于直徑小于20 cm的層析柱可以采用將柱頭翻轉(zhuǎn)向上后用蠕動泵或者洗耳球吸去篩網(wǎng)下面的氣泡），將柱頭放入層析柱內(nèi)，晃動柱頭使氣泡從柱頭邊緣排出，旋緊密封旋鈕（對于直徑>30 cm 的層析柱，先將密封圈不要旋的太緊，下壓軸頭讓柱體內(nèi)的液體通過柱頭反出以排出柱頭內(nèi)的氣泡，然后再旋緊密封旋鈕）。

7）按照 30 cm/h 的速度設(shè)定好流速，啟動泵壓柱至膠面穩(wěn)定（一般在1.5~2 h）。

8）去掉裝柱器（如果有的話），重新安裝柱頭，將壓力設(shè)在0.5 MPa，采用恒壓調(diào)速的方式壓柱1 h，標記此時的柱床高度。

9）并將柱頭壓至膠面標記位置下面5 mm，裝柱完成。

1.2柱效評價

1）柱效測定可以采用丙酮作為指示劑或者NaCl作為指示劑，按照下表配制指示劑溶液和流動相。

	丙酮法測柱效	NaCl法測柱效
樣品	1.0%（v/v）丙酮水溶液	0.8 M NaCl（溶于水）
樣品體積	1.0%柱體積	1.0%柱體積
流動相	水	0.4 M NaCl水溶液
流速	20 cm/h	20 cm/h
檢測器	UV 280 nm	電導(dǎo)率

2）計算柱效： 根據(jù)UV或者電導(dǎo)率曲線計算理論塔板高度（HETP）、理論塔板數(shù)（N）和非對稱因子（As）， 公式如下：

HETP=L/N ；N=5.54(VR/Wh)2

其中：VR=保留體積；Wh=半高峰寬；L=柱高；N=理論塔板數(shù)；VR和Wh的單位應(yīng)一致； As=b/a

其中：a=在10%峰高處的第一個半峰寬； b=在10%峰高處的第二個半峰寬

3）結(jié)果評價

由以上公式計算出的HETP的數(shù)值若小于三倍介質(zhì)平均顆粒大小且非對稱因子在0.7~1.3則判定為合格（對于Geldex介質(zhì)每米的塔板數(shù)應(yīng)該大于10000）。對于不理想的柱效需要分析原因并重新裝柱。

 

2 純化流程

2.1 層析柱預(yù)處理

對層析柱進行預(yù)處理，即采用0.1~0.5 M的NaOH對層析柱處理4小時以上以達到清洗、消毒和去除熱源的目的。

2.2 平衡

使用2~3倍柱體積的上樣平衡液平衡柱子，建議在平衡緩沖液中加入至少0.15 M的NaCl。

2.3 樣品準備

樣品需要過0.45μm以下的濾膜，粘度太高時可以適當稀釋，蛋白濃度一般不超過70mg/mL。

2.4 上樣

一般加載 0.5~2% 柱體積的樣品量，根據(jù)分離效果可以適當調(diào)整上樣體積。 

2.5 洗脫

繼續(xù)用平衡緩沖液沖洗層析柱，收集流出的不同組分，至不再有生物分子流出，一般需要1~1.5個柱體積。

 

3 清洗與再生

（1）先用1倍柱體積的 1 M NaCl 去除。

（2）對于變性的蛋白的去除，采用 1 M NaOH以20 cm/h流速沖洗2個柱體積。

（3）對于脂類或脂蛋白的去除，用 4倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

（4）對于無機污染物的去除，采用0.5 M的醋酸沖洗2個柱體積。

（5）最后用4倍柱體積的蒸餾水沖洗。

 

                                          HB220526