產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
Hieff Unicon® V Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Kit (with MgCl2) 是以 RNA 為模板進行多重定量 PCR 反應的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量 PCR 在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。獨特的 Buffer 和酶的設計，可用于一步法 RT-qPCR 凍干反應體系的配制和產(chǎn)品設計。
本試劑盒利用耐熱Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase進行定量擴增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的凍干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特異性 PCR 擴增的因子和提升多重 qPCR 反應擴增效率的因子，能夠在保證引物擴增效率的同時，進行多重熒光定量擴增反應。
本試劑盒酶 mix 中匹配凍干保護劑，可以直接用于凍干。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
13775ES60 / 13775ES80 / 13775ES92 |
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規(guī)格 |
100 T / 1000 T / 10000 T |
組分信息
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組分編號 |
組分名稱 |
13775ES60 (100 T) |
13775ES80 (1000 T) |
13775ES92 (10000 T) |
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13775-A |
4×Hifair® V Lyo-Buffer |
600 μL |
6 mL |
60 mL |
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13775-B |
MgCl2 (25 mM) |
500 μL |
5 mL |
50 mL |
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13775-C |
10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
240 μL |
2.4 mL |
24 mL |
【注】1. 4×Hifair® V Lyo-Buffer 為 Lyo-nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的簡寫。
2. 10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 和 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
- 反應體系（以25 μL為例）
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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4×Hifair® V Lyo-Buffer |
6 |
1× |
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10×Hifair® V Lyo-Enzyme Mix |
2.4 |
- |
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MgCl2 (25 mM) |
3 |
- |
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Primer Mix (10 μM) |
各0.4 |
0.16 μM |
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Probe Mix (10 μM) |
各0.2 |
0.08 μM |
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模板RNA |
1-5 |
- |
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RNase Free H2O |
to 25 |
- |
【注】使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
- 引物濃度：Primer Mix 中包含多對引物，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進行調(diào)整。
- 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。。
3. 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。
4. 反應體系：推薦使用25 - 50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
5. 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。
- 參考擴增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
50℃a |
10 min |
1 |
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預變性 |
95℃ |
5 min |
1 |
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擴增反應 |
95℃ |
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45 |
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60℃b |
30 secc |
【注】a. 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者55℃均可，時間 10-15 min。
b. 擴增反應：擴增反應溫度根據(jù)設計的引物Tm值進行調(diào)整。
c. 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據(jù)最短時間限制進行設置。
- 適用機型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20230731
