DNA-蛋白質(zhì)互作研究解決方案(下)
DNA-蛋白質(zhì)互作研究解決方案（上）介紹了一些表觀組學(xué)技術(shù)研究DNA-蛋白質(zhì)互作，但是有了組學(xué)數(shù)據(jù)，通常還需要一些驗證實驗。
這次，我們來介紹DNA與蛋白質(zhì)互作研究的驗證實驗。
熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。
雙熒光素酶實驗?zāi)軌蜻M行啟動子活性檢測、轉(zhuǎn)錄因子鑒定、miRNA 與LncRNA/circRNA/mRNA互作等。
圖.轉(zhuǎn)錄因子IRF3對IFN-β啟動子的調(diào)控作用
構(gòu)建Luc-IFN-β啟動子載體和IRF3的過表達載體后進行共轉(zhuǎn)染實驗，之后雙熒光素酶報告基因檢測顯示轉(zhuǎn)錄因子IRF3對IFN-β具有調(diào)控作用
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit 雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒HOT |
100 T/1000 T |
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Luciferase Reporter Gene Assay Kit 螢火蟲熒光素酶報告基因檢測試劑盒 |
100 T/500 T/1000 T |
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pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control pGM-CMV-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒陽性對照 |
1 μg |
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Luciferase Reporter Plasmid negative control （熒光素酶報告基因質(zhì)粒陰性對照） |
1 μg |
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pGMLR-CMV Luciferase Reporter Plasmid（pGMLR-CMV海腎熒光素酶報告基因質(zhì)粒） |
1 μg |
酵母雙雜交是將待研究的兩種蛋白質(zhì)分別克隆（融合）到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）上，構(gòu)建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。
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CoIP |
GST-pull down |
酵母雙雜交 |
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原理 |
抗原抗體特異性反應(yīng) |
GST對谷胱甘肽偶聯(lián)磁珠得特異性 |
真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程 |
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檢測瞬時相互作用 |
否 |
否 |
是 |
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檢測弱相互作用 |
否 |
否 |
是 |
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檢測直接相互作用 |
否 |
是 |
否 |
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驗證方式 |
體內(nèi)直接或間接相互作用檢測 |
體外直接得相互作用檢測 |
體內(nèi)直接或間接相互作用檢測 |
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是否需要蛋白純化 |
否 |
是 |
否 |
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是否需要抗體 |
是 |
否 |
否 |
CoIP實驗步驟
GST-pull down實驗步驟
酵母雙雜交實驗步驟
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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蛋白A/G瓊脂糖純化樹脂 |
1/2/5/25/100 mL |
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蛋白A/G瓊脂糖快速純化樹脂 |
5 /25 /100 mL |
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蛋白A/G免疫沉淀磁珠 |
1/5 mL |
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GSTSep Glutathione MagBeads GST標(biāo)簽蛋白純化磁珠 |
1/2/5/25 mL |
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X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷 |
25/100/250/500 mg |
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Aureobasidin A(AbA) 金擔(dān)子素A |
1/5/10 mg |
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WB/IP裂解液 |
100 mL |
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蛋白酶抑制劑Cocktail |
1/10/100/500 mL |
相關(guān)實驗，還有什么想了解的呢？留言區(qū)留言告訴我們吧！
