隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷發(fā)展，靶向治療的越來越成熟，而靶向治療的前提是對藥物的分子靶點(diǎn)進(jìn)行基因檢測，找到導(dǎo)致遺傳病或腫瘤發(fā)生的基因突變。ARMS-PCR是一項在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新方法，可檢測出DNA中各種點(diǎn)突變，是目前國際上腫瘤個體化分子檢測最重要、最廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，其在臨床應(yīng)用中的優(yōu)勢已被業(yè)內(nèi)專家廣泛認(rèn)可。
ARMS-PCR即擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)PCR（Amplification Refractory Mutation System PCR，ARMS-PCR），又稱為等位基因特異性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR），通過引物3’末端引物設(shè)計控制等位基因特異性延伸，并結(jié)合Taqman探針的方法檢測熒光信號值，從而判斷野生型等位基因和突變型野生基因。
ARMS PCR引物設(shè)計時等位基因兩條上游引物中3’端核苷酸不同，兩條引物分別對野生型和突變型特異。擴(kuò)增時，與模板不能完全匹配的上游引物將不能完全形成互補(bǔ)堿基對，形成錯配，延伸受阻，不能產(chǎn)生PCR產(chǎn)物，而與模板匹配的引物體系則可以擴(kuò)增出相應(yīng)的PCR產(chǎn)物，Taqman探針上相應(yīng)的熒光基團(tuán)可產(chǎn)生熒光信號被儀器檢測到，通過分析熒光數(shù)據(jù)確認(rèn)其基因型。
圖1：ARMS-PCR基本原理（圖源于網(wǎng)絡(luò)，侵刪）
翌圣Hieff Unicon® Multiplex ARMS qPCR Mix是基于擴(kuò)增阻滯原理開發(fā)的試劑盒，能夠有效進(jìn)行ARMS-PCR介導(dǎo)的基因分型。
1. 產(chǎn)品特點(diǎn)
選擇性高：可檢測多種基因突變；
靈敏度高：突變型引物可檢測低至10ng/ μL DNA中0.05%的突變；
判讀簡便：結(jié)果直觀，客觀判讀結(jié)果，簡便易行；
操作便捷：適用于多種PCR儀器，操作方法標(biāo)準(zhǔn)化，90分鐘內(nèi)完成上機(jī)檢測。
2. 產(chǎn)品性能數(shù)據(jù)
2.1產(chǎn)品阻滯效果好
實(shí)驗：模板投入量5μL，突變型引物擴(kuò)增10ng/μL野生型模板和等拷貝數(shù)突變型質(zhì)粒
位點(diǎn)：KRASG13D（38G>A）
紅色：13755；藍(lán)色：競品
圖2：野生型引物擴(kuò)增野生型模板和突變型模板。根據(jù)擴(kuò)增曲線發(fā)現(xiàn)野生型模板無起峰或野生型和突變型Ct值差異≧6-8，可成功區(qū)分野生型和突變型基因
2.2產(chǎn)品檢測率可達(dá)0.05%
實(shí)驗一：自混標(biāo)準(zhǔn)品制備方法（50%）：50μL 10ng/μL野生型DNA+50μL 3×103copies突變型質(zhì)粒。
位點(diǎn)：KRASG13D(38G>A)
圖3：根據(jù)擴(kuò)增曲線發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)品在0.05%的濃度時仍有較好的表現(xiàn)
實(shí)驗二：購買的5%的標(biāo)準(zhǔn)品（50ng/μL)用文庫稀釋液稀釋成10ng/μL，進(jìn)一步用10ng/μL 293gDNA稀釋成0.1%和0.05%。
位點(diǎn)：L858R
紅色：13755；綠色：競品
圖4：根據(jù)擴(kuò)增曲線，位點(diǎn)在10ng/μL的野生型gDNA背景下檢出率可高達(dá)0.05%，并經(jīng)過商業(yè)化標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)一步驗證，說明我司產(chǎn)品檢出率良好
2.3產(chǎn)品穩(wěn)定性好
2.3.1產(chǎn)品反復(fù)凍融10次不影響其擴(kuò)增以及阻滯效果
實(shí)驗：紅色：-20℃；綠色：真實(shí)反復(fù)凍融5次；藍(lán)色：真實(shí)反復(fù)凍融8次；紫色：真實(shí)反復(fù)凍融10次。
位點(diǎn)：L858R
圖5：13755試劑真實(shí)反復(fù)凍融10次不影響其擴(kuò)增以及阻滯效果
2.3.2 在37℃，7天條件下不影響其擴(kuò)增以及阻滯效果
實(shí)驗：紅色：-20℃；綠色&紫色：37℃7天。
位點(diǎn)：L858R
圖6：13755試劑37℃，7天不影響其擴(kuò)增以及阻滯效果
產(chǎn)品訂購
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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2×Hieff Unicon® Multiplex ARMS qPCR Mix多重突變擴(kuò)增阻滯熒光定量預(yù)混液 |
13755ES60 |
100T |
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13755ES80 |
1000T |
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13755ES92 |
10000T |
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2×Hieff Unicon® Multiplex ARMS qPCR Kit多重突變擴(kuò)增阻滯熒光定量試劑盒 |
13229ES60 |
1000T |
