讓我們先來看看細(xì)胞遭受小黑點入侵后的災(zāi)難現(xiàn)場。
小黑點之所以這么令人頭痛，是由于它的數(shù)量會隨著培養(yǎng)時間的增加而不斷增加，當(dāng)數(shù)量多到一定程度的時候，就會對細(xì)胞的生長造成一定的影響，嚴(yán)重影響科研的進(jìn)展。在顯微鏡下觀察時往往表現(xiàn)為沒有光澤，體積較小的黑色顆粒。
小編這邊結(jié)合自己多年細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)歷和接觸到的客戶案例，跟大家分享下培養(yǎng)細(xì)胞過程中碰到過的小黑點。
化學(xué)或者物理的強烈刺激（例如胰酶消化時間過長，吹打細(xì)胞太過用力等）往往會導(dǎo)致細(xì)胞死亡，產(chǎn)生很多的細(xì)胞碎片。在顯微鏡下進(jìn)行觀察時，可以看到很多呈不規(guī)則形態(tài)、沒有光澤的顆粒粘附在細(xì)胞培養(yǎng)皿的底部。
狀態(tài)不好的細(xì)胞往往貼壁能力較強，因此切勿用移液器進(jìn)行強力的吹打，從而損害了健康的細(xì)胞；另外，控制好胰酶消化的時間，只需保證大部分正常的細(xì)胞被消化下來就可以了，然后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)皿。
體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞很容易受到培養(yǎng)環(huán)境因素的影響，例如營養(yǎng)成分的改變、氧的供給、毒素、細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累、pH、 剪切力、細(xì)胞密度及微生物污染等。這些環(huán)境的改變都有可能誘發(fā)細(xì)胞的凋亡，從而產(chǎn)生很多分泌的凋亡小體。凋亡小體大多游離在培養(yǎng)基中，但也有一些會通過暴露的核酸彼此之間相互黏連，從而形成一個棕色的凋亡小體團(tuán)塊，沒有細(xì)胞光澤。
建議：
細(xì)胞培養(yǎng)的過程中一定要控制細(xì)胞傳代的時間，不能讓細(xì)胞"長過"；不要使用過酸或者過堿的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；選用內(nèi)毒素含量較低的血清。
磷酸鈣是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
建議：
經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著增多，對于大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要進(jìn)過高溫滅活處理的。
對于細(xì)胞培養(yǎng)過程中的小黑點到底是什么，目前呼聲高的非黑膠蟲莫屬，但是小編查看了很多的資料，依舊不知道其為何方神圣。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白結(jié)晶，因此消滅黑膠蟲的方式也是各式各樣。
建議：
如果污染的細(xì)胞數(shù)量不是很多，建議直接丟棄，或者重新復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
黑膠蟲的污染很難定性，大部分被黑膠蟲污染的細(xì)胞都存在生長遲緩，培養(yǎng)基顏色沒有明顯的改變現(xiàn)象，更像是受到了支原體的污染。已有通過使用支原體去除試劑解決黑膠蟲污染困擾的成功案例，為此Yeasen公司特別研發(fā)了針對支原體污染的一系列產(chǎn)品，包括支原體的檢測，支原體的去除，以及去除后防止支原體再度感染的支原體預(yù)防試劑。（往下看）
產(chǎn)品訂購信息：
|
產(chǎn)品 |
貨號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
|
支原體檢測 |
|||
|
MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法） 靈敏度高適用于制藥過程中出現(xiàn)的支原體污染 |
40618ES25 |
25 T |
3155.00 |
|
40618ES60 |
100 T |
10355.00 |
|
|
40601ES10 |
10 assays |
327.00 |
|
|
40601ES20 |
20 assays |
557.00 |
|
|
MycAwayTM Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒 快至30分鐘出結(jié)果，熱賣 |
40612ES25 |
25 T |
1653.00 |
|
40612ES60 |
100 T |
6283.00 |
|
|
支原體去除試劑： |
|||
|
MycAwayTM Spray (Ready-to-use)支原體噴霧劑（即用型） |
40605ES02 |
500 mL |
237.00 |
|
40605ES03 |
2×500 mL |
407.00 |
|
|
40605ES08 |
10×500 mL |
1617.00 |
|
|
Mycoplasma Elimination ReagentMycAwayTM 支原體去除試劑（1000×） |
40607ES01 |
100 uL |
168.00 |
|
40607ES03 |
1 mL |
467.00 |
|
|
40607ES08 |
5×1 mL |
1357.00 |
|
|
支原體預(yù)防試劑： |
|||
|
40608ES03 |
1 mL |
387.00 |
|
|
40608ES08 |
5×1 mL |
1257.00 |
|
|
40609ES60 |
100 mL |
247.00 |
|
|
40610ES60 |
100 mL |
237.00 |
|
