NGS因其檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)且兼具定性和定量檢測，在病原檢測、腫瘤突變檢測、生殖遺傳等領(lǐng)域展現(xiàn)了極為廣闊的臨床與科研應(yīng)用前景。文庫構(gòu)建作為NGS測序的核心步驟，直接影響測序質(zhì)量?；贗VD產(chǎn)品的注冊審查指導(dǎo)原則，需要提供主要原材料的研究性資料，結(jié)合原材料基本信息、參數(shù)指標(biāo)及供應(yīng)來源等因素綜合分析并驗(yàn)證，確定最適的原材料來源。常規(guī)DNA和RNA建庫流程主要包含cDNA合成、DNA片段化、接頭連接和文庫擴(kuò)增等關(guān)鍵步驟，各步驟包含的原料酶種類較多，原料酶篩選一定程度上拉長了研發(fā)周期。在此基礎(chǔ)上，高性價(jià)比、簡潔的建庫模塊產(chǎn)品成就IVD產(chǎn)品開發(fā)的新選擇。

圖1.DNA常規(guī)建庫流程（左）和RNA建庫流程（右），Illumina平臺(tái)為例

逆轉(zhuǎn)錄合成是RNA-Seq的核心環(huán)節(jié)，高靈敏度、cDNA高產(chǎn)量、可兼容復(fù)雜結(jié)構(gòu)模板等兼具多功能于一體的新型高效率逆轉(zhuǎn)錄酶是心之所向。翌圣ZymeEditor™酶改造平臺(tái)通過對M-MLV進(jìn)行定向改造獲得了性能全方面提升的全能型逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品，可兼具RNA-seq、單細(xì)胞測序、cDNA克隆和文庫構(gòu)建等多個(gè)應(yīng)用場景。

圖2.13488ES應(yīng)用于RNA-seq性能

受限于平臺(tái)測序讀長短的不足，建庫前DNA需要進(jìn)行隨機(jī)打斷。早期酶法片段化因打斷均一性、偏好性問題讓人望而卻步，翌圣生物匠心研發(fā)，優(yōu)化開發(fā)出兩款特色片段化酶，37℃ 3-30 min作用的劇烈打斷酶和30℃ 10-40 min的溫和打斷酶?；陔S機(jī)打斷的酶法片段化產(chǎn)品逐步改善短板，組合成滿足不同樣本、不同測序類型等眾多需求的DNA片段化、末修和加A的模塊產(chǎn)品。

圖3. 不同DNA片段化酶作用于DNA的打斷效果：劇烈打斷酶（左）和溫和打斷酶（右）

文庫轉(zhuǎn)化率是評估文庫質(zhì)量的重要指標(biāo)，文庫轉(zhuǎn)化率高一定程度上意味著文庫豐富度、測序數(shù)據(jù)均一性更好。常規(guī)T4 DNA 連接酶側(cè)重優(yōu)化高效率連接但易出現(xiàn)片段自連，從而降低文庫轉(zhuǎn)化率，影響文庫豐富度與測序質(zhì)量。翌圣ZymeEditor™酶改造平臺(tái)對T4 DNA Ligase進(jìn)行定向改造獲得新型突變體，搭配精心優(yōu)化的連接Buffer，開發(fā)出熱穩(wěn)定性高、片段自連率低的接頭連接模塊產(chǎn)品，大大提高文庫轉(zhuǎn)化率。

圖4.12996ES熱穩(wěn)定性和接頭殘留分析

NGS文庫制備方法都需要用到PCR擴(kuò)增酶，大多數(shù)高保真DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶結(jié)活性和3'→5'外切酶的活性，可沿5'→3'方向合成DNA的同時(shí)糾正錯(cuò)誤摻入的堿基，從而快速、高保真的擴(kuò)增DNA片段。但很少有酶是專為NGS設(shè)計(jì)的，高效、準(zhǔn)確、特異且能夠無偏倚地?cái)U(kuò)增不同大小和GC含量的靶點(diǎn)，同時(shí)又具備可提前預(yù)混引物的文庫擴(kuò)增產(chǎn)品選擇性并不多。翌圣生物開發(fā)出含有獨(dú)特設(shè)計(jì)的超高保真DNA聚合酶及經(jīng)過優(yōu)化的熱啟動(dòng)PCR預(yù)混液，其專門針對高效、高保真和低偏好的NGS文庫擴(kuò)增，應(yīng)對復(fù)雜NGS文庫擴(kuò)增的挑戰(zhàn)。

圖5.12980ES穩(wěn)定性和擴(kuò)增錯(cuò)誤率分析

除了以上一系列NGS建庫模塊產(chǎn)品外，我們還提供一站式的原酶產(chǎn)品，以滿足不同客戶的組合化需求。翌圣NGS建庫原料產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格的出廠質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格的批次性能和穩(wěn)定性質(zhì)控，讓您建庫無憂。