宿主細(xì)胞殘留DNA是生物制品生產(chǎn)過(guò)程中涉及的工藝相關(guān)雜質(zhì)，它不僅會(huì)降低生物藥的有效性，還可能帶來(lái)傳染性或致瘤性等安全問題。因此，各國(guó)的監(jiān)管機(jī)構(gòu)都對(duì)生物制品中殘余DNA的含量進(jìn)行了限制。
WHO和美國(guó)FDA現(xiàn)行指導(dǎo)方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，美國(guó)FDA還指出生物制品宿主細(xì)胞殘留DNA不高于100 pg/劑。歐洲藥典通則規(guī)定生物制品殘留DNA限度不超過(guò)10 ng/劑，但對(duì)個(gè)別疫苗的殘留DNA限定標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格，如甲型肝炎滅活疫苗中的DNA殘留量不得超過(guò)100 pg/劑，乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過(guò)10 pg/劑。中國(guó)藥典2020年版三部規(guī)定，以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑DNA殘留量不能超過(guò)100 pg/劑，以細(xì)菌或真菌基質(zhì)生產(chǎn)的疫苗DNA殘留量不能超過(guò)10 ng/劑。
此外，對(duì)于外源性DNA殘留量測(cè)定的方法，各國(guó)藥典也給出了指導(dǎo)建議。美國(guó)藥典2017年版USP40-NF35通則1130介紹了3種外源性DNA殘留量測(cè)定的方法，分別為DNA探針雜交法、閾值法和實(shí)時(shí)定量PCR法。歐洲藥典提出了實(shí)時(shí)定量PCR和免疫酶法，這兩種定量宿主細(xì)胞殘留DNA的靈敏分析方法。中國(guó)藥典2020年版三部通則3407也規(guī)定，宿主細(xì)胞DNA殘留量檢測(cè)方法為DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR法。
其中，qPCR法具有極高的靈敏度、序列特異性和準(zhǔn)確性，可為生物制藥工業(yè)在工藝研究和成品質(zhì)量控制方面提供可靠的檢測(cè)手段，現(xiàn)已成為各生物制品廠家首選檢測(cè)方法。
翌圣生物自主研發(fā)的CHO&HEK293&Vero&E.coli共4款宿主細(xì)胞殘留DNA的qPCR法檢測(cè)試劑盒，可快速高效檢測(cè)生物藥中宿主DNA殘留量。
靈敏度高：檢測(cè)下限可低至0.5fg/μL
準(zhǔn)確性高：DNA參考品與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)曲基本無(wú)偏差，檢測(cè)值CV＜5%
精密度高：重復(fù)性CV值＜10%，好于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（15%），中間精密度＜15%
專屬性強(qiáng)：不同細(xì)胞系間無(wú)交叉反應(yīng)
定量準(zhǔn)確：配套專屬磁珠法樣本前處理試劑盒
操作時(shí)間短：3小時(shí)內(nèi)完成全部檢測(cè)流程
穩(wěn)定性好：多次反復(fù)凍融擴(kuò)增效率仍較高，-20℃可儲(chǔ)存2年
耐用性強(qiáng)：DNA碎片化程度不影響檢測(cè)結(jié)果，碎片化DNA回收率高，適配多款qPCR儀器
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產(chǎn)品名稱 |
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產(chǎn)品組分 |
CHO qPCR MIX DNA Dilution Buffer CHO DNA Control |
HEK293 qPCR mix(UDG plus) HEK293 Primer&probe mix DNA Dilution Buffer HEK293 DNA Control |
Vero qPCR mix Vero Primer&probe mix DNA Dilution Buffer Vero DNA Control |
E.Coli qPCR mix E.Coli Primer&probe mix DNA Dilution Buffer E.Coli DNA Control |
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產(chǎn)品規(guī)格 |
100T |
100T |
100T |
100T |
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應(yīng)用 |
定量分析檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中的宿主細(xì)胞 DNA 殘留 |
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定量限 |
0.5 fg/μL |
6 fg/μL |
1 fg/μL |
30 fg/μL |
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前處理試劑盒 |
磁珠法DNA殘留檢測(cè)前處理試劑盒：手工和預(yù)封裝 2 種形式，適配所有殘留檢測(cè)試劑盒 |
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適用機(jī)型 |
Bio-Rad：CFX96 Optic Module； Thermo Scientific：ABI 7500；ABI QuantStudio 5；ABI StepOnePlus； 上海宏石醫(yī)療科技：SLAN-96S. |
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產(chǎn)品 |
貨號(hào) |
品名 |
規(guī)格 |
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殘留DNA檢測(cè)試劑盒 |
41301ES60 |
CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit |
100T |
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41302ES60 |
HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit |
100T |
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41303ES60 |
Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit |
100T |
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41304ES60 |
E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit |
100T |
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樣本前處理試劑盒 |
18461ES60 |
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit |
100T |
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18462ES32 |
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA |
2×16 T |
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18462ES59 |
MolPure® Mag32 Residual DNA Sample Preparation Kit FA |
6×16 T |
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核酸提取儀器 |
80501ES01 |
Auto-Pure 32A automated nucleic acid extraction system |
32通量 |
