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            JC-1 線粒體膜電位熒光探針
             
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            產(chǎn)品說明書
                  
            FAQ
                  
            COA
                  
            已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
             
            產(chǎn)品描述
            


            JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi)，可以用來檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來衡量。觀察時，只需使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。
            


            JC-1 用于檢測細(xì)胞的線粒體膜電位時常用的濃度范圍為 1～20 µg/mL，對于很多細(xì)胞適宜采用的 JC-1濃度為 10 µg/mL。 
            



            
產(chǎn)品性質(zhì)
            
 
            


            
	
		
            
			
			
            化學(xué)名稱（Chemical name）
            
			            		
			
			
            5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            CAS號（CAS NO.）
            
			            		
			
			
            3520-43-2
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            分子式（Formula）
            
			            		
			
			
            C25H27Cl4IN4
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            分子量（Molecular Weight）
            
			            		
			
			
            652.23 
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            純度（Purity）
            
			            		
			
			
            ＞95%（HPLC）
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            外觀（Appearance）
            
			            		
			
			
            紅褐色粉末
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            溶解性（Solubility）
            
			            		
			
			
            溶于DMSO和DMF，不溶于水
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            熒光光譜
            

			
            （Fluorescent spectrum）
            
			            		
			
			
            單體形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm
            

			
            聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm
            
			            		
		
            
		
            
			
			
            結(jié)構(gòu)式
            
			            		
			
			
            22.bmp 
            
			            		
		
            
	            

            



            
運(yùn)輸與保存方法
            


            冰袋（wet ice）運(yùn)輸。
            


            粉末-20℃干燥避光保存，至少一年有效。儲存液分裝成單次使用量，-20℃干燥避光保存，避免反復(fù)凍融，約一年有效。
            


             
            


            使用方法
            


            1. 工作液配制：
            


            1）JC-1粉末（5 mg）：直接加1 mL DMSO到粉末內(nèi)，室溫顛倒混勻使其充分溶解，即得到5 mg/mL的儲存液。溶液分裝成小量儲存于-20℃，避光干燥，避免反復(fù)凍融。
            


            2）JC-1儲存液（1 mg in DMSO）：本品是JC-1的DMSO儲存液，濃度為5 mg/mL。使用者需要根據(jù)單次用量來分裝，-20℃避光干燥，避免反復(fù)凍融。
            


            3）工作液配制：將凍存的儲存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)基直接稀釋儲存液（5 mg/mL）到需要的工作液濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心JC-1工作液1 min，小心吸取上清轉(zhuǎn)移到新的管子內(nèi)。整個過程要避光操作。注意：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過程中形成聚集顆粒，則建議細(xì)胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒后再使用。
            


            2. JC-1染色步驟（流式細(xì)胞儀）
            


            1）于6-，12或24-孔板上進(jìn)行細(xì)胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。 注：進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)時的細(xì)胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細(xì)胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
            


            2）取0.5 mL細(xì)胞懸液至無菌的離心管內(nèi)；
            


            3）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
            


            4）用0.5 mL JC-1工作液重懸細(xì)胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。
            


            5）室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
            


            6）用2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清；
            


            7）重復(fù)步驟6）；
            


            8）用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細(xì)胞，即可進(jìn)行后續(xù)的流式分析。注意：請馬上進(jìn)行流式定量分析，此細(xì)節(jié)很重要。
            


            數(shù)據(jù)分析：含有紅色JC-1聚集物的健康細(xì)胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細(xì)胞用FL1（FITC）通道檢測。
            


            3.  JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）
            


            A． 懸浮細(xì)胞
            


            1）-6）同上JC-1染色步驟（流式細(xì)胞儀）；
            


            7）用0.3 mL的緩沖液重懸細(xì)胞，即可進(jìn)行熒光顯微鏡檢測。注意：請馬上進(jìn)行熒光顯微分析，此細(xì)節(jié)重要。
            
      數(shù)據(jù)分析：使用可同時檢測熒光素fluorescein/羅丹明或者熒光素fluorescein/Texas Red™的雙帶帶通濾波器進(jìn)行檢測。未凋亡的活細(xì)胞因JC-1聚集后線粒體呈紅色，最大發(fā)射波長為590 nm。凋亡和壞死細(xì)胞染料一直以單體形式存在，線粒體呈現(xiàn)綠色。最大發(fā)射波長為530 nm。
            


            B． 貼壁細(xì)胞
            


            1）培養(yǎng)皿內(nèi)用蓋玻片進(jìn)行細(xì)胞爬片或者細(xì)胞培養(yǎng)在腔室玻片（chamber slide）上。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。
            


            2）染色前開始配制JC-1工作液，配制步驟見上。
            


            3） 吸掉細(xì)胞培養(yǎng)液，然后加入足夠覆蓋所有細(xì)胞的JC-1工作液。于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進(jìn)行充分的染色。
            


            4）吸掉培養(yǎng)液，然后用合適的緩沖液來清洗細(xì)胞2次。
            


            5）加入2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液（培養(yǎng)液可含有血清和酚紅）或者PBS緩沖液，于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察。數(shù)據(jù)分析同A. 懸浮細(xì)胞。
            


            4. JC-1染色步驟（熒光酶標(biāo)儀）
            


            1）-7）同上JC-1染色步驟（流式細(xì)胞儀）；
            


            9）用300 μL緩沖液重懸細(xì)胞；然后按照每孔100 μL的量將染色好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到黑色的96孔板內(nèi)，即可進(jìn)行熒光酶標(biāo)板分析。注意：請馬上進(jìn)行熒光顯微分析，此細(xì)節(jié)重要。
            


            數(shù)據(jù)分析：健康細(xì)胞內(nèi)，JC-1單體聚集形成聚合物，線粒體呈現(xiàn)強(qiáng)烈的紅色熒光（激發(fā)波長550 nm, 發(fā)射波長600 nm）。凋亡或壞死細(xì)胞內(nèi)JC-1以單體形式存在，線粒體呈強(qiáng)烈的綠色熒光（激發(fā)波長485 nm, 發(fā)射波長535 nm）。然后計(jì)算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值，用來判斷細(xì)胞健康程度。
            



            
注意事項(xiàng)
            
 
            


            1）JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強(qiáng)光接觸。
            


            2）JC-1染色完成后，立即進(jìn)行后續(xù)的結(jié)果分析非常必要；
            


            3）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
            
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
            


             
            


             
            


            HB171205
            

               
             
             
             
             
             
             
             
            400-6111-883