Protein Silver Stain Kit 蛋白質(zhì)銀染試劑盒
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
生化實(shí)驗(yàn)中蛋白質(zhì)通過凝膠電泳的方式分離后需經(jīng)過染色才能肉眼可見，染色方法有兩種：1）染料染色法；2）金屬染色法。前者主要是考馬斯亮藍(lán)染色法，后者主要采用銀染法。前者操作比較簡(jiǎn)單、省時(shí)，但是后者具有較高的檢測(cè)靈敏性，可檢測(cè)到10-100 ng蛋白質(zhì)，比考馬斯亮藍(lán)染色法靈敏100多倍。
本試劑盒采用銀染的方法，用于檢測(cè)聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠中的微量蛋白質(zhì)。
產(chǎn)品信息
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
36244ES25（25T） |
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36244-A |
增敏液（100×） |
26 mL |
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36244-B |
銀染液（100×） |
26 mL |
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36244-C |
顯色液A |
1.5 mL |
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36244-D |
顯色液B（5×） |
4×125 mL |
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36244-E |
終止液（20×） |
125 mL |
儲(chǔ)存條件
室溫保存。有效期1年。銀染液（100×）、顯色液A需避光保存。
使用說明
1.試劑配制
1）固定液的配制（自備）： 加入50 mL乙醇、10 mL冰乙酸和40 mL去離子水，混勻。
2）30%乙醇的配制（自備）：70 mL去離子水中加入30 mL乙醇，混勻。
3）增敏液(1×)的配制：99 mL去離子水中加入1 mL增敏液(100×)，混勻。增敏液(1×)配制后需在2 h內(nèi)使用。
4）銀染液(1×)的配制：99 mL去離子水中加入1 mL銀染液(100×)，混勻。銀染液(1×)配制后需在2 h內(nèi)使用。
5）顯色液的配制：80 mL 去離子水中加入20 mL顯色液B(5×)，再加入0.05 mL顯色液A，混勻后即為顯色液。顯色液配制后需在20分鐘內(nèi)使用。
6）終止液(1×)的配制：95 mL去離子水中加入5 mL終止液（20×）混勻。終止液(1×)配制后宜當(dāng)天使用。
2.使用方法
以8×10 cm凝膠為例，不同凝膠大小可按比例調(diào)整增敏液、銀染液和終止液的體積。
1）固定：電泳結(jié)束后，取凝膠放入約100 mL固定液中，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)20 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
2）洗滌：棄固定液，加入100 mL 30%乙醇，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)10 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。棄30%乙醇，加入200 mL去離子水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)10 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
3）增敏：棄水，加入100 mL增敏液(1×)，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)2 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
4）洗滌（共2次）：棄原有溶液，加入200 mL去離子水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)1 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。棄水，再加入200 mL去離子水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)1 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
5）銀染：棄水，加入100 mL銀染液(1×)，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)10-20 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
6）洗滌：棄原有溶液，加入100 mL 去離子水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)1-1.5 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。水洗滌的時(shí)間不能超過1.5 min。
7）顯色： 棄水，加入100 mL顯色液，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)3-10 min，直至出現(xiàn)比較理想的預(yù)期蛋白條帶，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
8）終止：棄顯色液，加入100 mL終止液(1×)，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)10 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
9）洗滌：棄原有溶液，加入100 mL 去離子水，在搖床上室溫?fù)u動(dòng)2-5 min，搖動(dòng)速度為60-70 rpm。
10）保存顯色出的蛋白質(zhì)條帶并記錄。
注意事項(xiàng)
1.需自備乙醇和冰乙酸（分析純）。
2.顯色過程較快，要注意把握時(shí)間，避免染色過度。
3.所用器皿要很潔凈，最好使用潔凈的玻璃器皿，不要用手直接接觸，以免雜蛋白污染。
4.使用說明中的使用次數(shù)及各種溶液的使用量適用于大小為8×10 cm厚度為0.75-1 mm的凝膠。對(duì)于更大的凝膠，各種溶液的使用量需按凝膠面積的比例放大，對(duì)于更厚的凝膠，作用時(shí)間需按照厚度的比例適當(dāng)延長(zhǎng)。
5.清洗用水盡量用高純度去離子水如dd H2O，可以減少背景著色。
6.本試劑盒也可以用于2D凝膠的銀染，并且染色后和后續(xù)的質(zhì)譜檢測(cè)兼容。
7.使用本試劑盒只需 90 分鐘即可完成銀染實(shí)驗(yàn)。
8.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
9.本產(chǎn)品僅作科研用途！
Ver.CN20230913
