YeaCell^TM 1st Strand Synthesis kit for Single Cell 3? RNA-seq利用Oligo (dT)18及TSO Primer引物對(duì)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本基因進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，適用于微流控的微量體系。其產(chǎn)物可以經(jīng)過通用引物進(jìn)行PCR反應(yīng)富集cDNA，然后使用翌圣的酶切建庫(kù)試劑盒，構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。本產(chǎn)品采用了在M-MLV(RNase H-)Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上經(jīng)過多點(diǎn)突變的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，具有高逆轉(zhuǎn)錄效率，低錯(cuò)配率，高保真度等優(yōu)勢(shì)。

 

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)	名稱	13594ES04	13594ES08	13594ES95
13594-A	RT buffer	76 μL	152 μL	2×1130 μL
13594-B	RT Enzyme mix	36 μL	72 μL	1056 μL

 

運(yùn)輸與保存方法

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

適用范圍

1.適用于哺乳動(dòng)物或者沒有細(xì)胞壁的真核生物細(xì)胞的高通量單細(xì)胞全長(zhǎng)cDNA合成。

2.10 pg~1 μg帶有poly（A）的總RNA。

3.本品不適合原核生物總RNA和有降解的RNA，如FFPE RNA。

 

注意事項(xiàng)

1.請(qǐng)使用無(wú)RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。

2. 建庫(kù)需要的其他試劑需自備或另外購(gòu)買。

3.本產(chǎn)品僅用作科研用途！

 

使用方法
方法1：若實(shí)驗(yàn)方案為高通量單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，根據(jù)不同的單細(xì)胞儀器進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整

1）準(zhǔn)備Reaction Buffer，提前將RT buffer，Template Switch Oligo（自備），Reducing Agent B（自備）室溫解凍，顛倒混勻，微離心于管底，置于冰上備用。

表1 Reaction Buffer反應(yīng)體系

組分/樣品	體積（μL）
RT buffer	18.8
Template Switch Oligo	2.4
Reducing Agent B	2
RT Enzyme mix	8.8
Total	32

2）按照上表將各組分混合于8聯(lián)排低吸附離心管中，槍頭緩慢吹打瞬離，置于冰上。

3）后續(xù)使用參照Cat#12520ES（適配10x Genomics單細(xì)胞儀器）說明書進(jìn)行后續(xù)操作。

方法2：若為逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，參考此步驟

Step 1 RNA變性

1.按照表2配置反應(yīng)液：

表2 RNA預(yù)變性反應(yīng)體系

名稱	體積（μL）
Oligo (dT)18（20~50 mM）(自備)	1
已裂解的cell or RNA	12
Total	13

2.使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。于PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：（熱蓋80℃ on）70℃，5 min；立即置于冰上3 min。

Step 2 第一鏈cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 將第一鏈合成試劑從-20°C取出，室溫解凍，顛倒混勻后瞬離。按表3所示，配制第一鏈cDNA合成的反應(yīng)液。

表3 第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系

名稱	體積（μL）
上一步	13
5×RT Buffer	4
TSO Primer（需自行摸索濃度）(自備)	1
RT Enzyme mix	1
ddH2O	1
Total	20

2.使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。于PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：（熱蓋105℃ on）42℃，90 min；70℃，15min；4℃，hold。

3.產(chǎn)物可直接用于二鏈cDNA合成或于-80℃暫存。

Ver. CN20230706