腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是1982年Barde等首先在豬腦中發(fā)現(xiàn)的一種具有神經(jīng)營養(yǎng)作用的蛋白質(zhì)，屬于NGF家族神經(jīng)營養(yǎng)因子的成員，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中特定神經(jīng)元亞群分化和存活所必需的。神經(jīng)營養(yǎng)蛋白家族由至少四種蛋白質(zhì)組成，包括NGF，BDNF，NT-3和NT-4/5。這些分泌的細(xì)胞因子被合成為前前肽，其被蛋白水解處理以產(chǎn)生成熟的蛋白質(zhì)。所有神經(jīng)營養(yǎng)因子都有六個保守的半胱氨酸殘基，它們參與三個二硫鍵的形成，并且在氨基酸水平上都共享約55%的序列同源性。與NGF類似，生物活性BDNF被預(yù)測為非共價連接的同源二聚體。BDNF可以與低親和力細(xì)胞表面受體LNGFR結(jié)合，該受體也結(jié)合其他神經(jīng)營養(yǎng)因子，如NGF，NT-3和NT-4。然而，BDNF通過高親和力細(xì)胞表面受體gp145/trkB發(fā)出信號來介導(dǎo)其神經(jīng)營養(yǎng)特性。

翌圣Human BDNF ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿中的人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Human BDNF)。特異性抗人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，經(jīng)過孵育，樣本中存在的人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產(chǎn)品信息

貨號	97055ES48 / 97055ES96
規(guī)格	48 T / 96 T
檢測范圍	15.63-1000 pg/mL
檢測方法	雙抗夾心法
檢測物種	人
檢測時長	4.5小時
靈敏度	10.1 pg/mL
稀釋線性	83 - 117%
回收率	81 - 117%
板內(nèi)差	5.5%
板間差	9.6%

 

實驗數(shù)據(jù)

1. 標(biāo)曲數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實驗數(shù)據(jù)分析。

2. 靈敏度檢測

BDNF的最低檢測限為10.1 pg/mL，通過使用重復(fù)檢測20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計算得出。

3. 精密度檢測

酶標(biāo)板內(nèi)精密度

3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測定8次，評估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。

酶標(biāo)板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測24次，評估酶標(biāo)板間的精密度。

項目	板內(nèi)精密度			板間精密度
樣本	1	2	3	1	2	3
	8	8	8	24	24	24
平均值	467.3	153.2	50.5	429.1	138.2	52.8
標(biāo)準(zhǔn)差	22.3	7.9	3.4	32.6	14.9	5.6
變異系數(shù)（%）	4.8%	5.2%	6.7%	7.6%	10.8%	10.5%

4. 回收率檢測

 通過不同水平的BDNF添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:

樣本類型	平均回收率(%)	范圍（%）
血清	90.7	82-99.6
血漿	103.7	97.7-116.6
細(xì)胞培養(yǎng)上清	98.3	80.5-113.3

5. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	97.1	87.3-103.5
1:04	97.9	92.2-104.1
1:08	103.1	88.6-115
1:16	100.4	88.6-115.4

 

血漿稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	107.1	97.3-116.9
1:04	101.4	94.3-108.9
1:08	100.5	86.5-116.8
1:16	108.2	92.5-116.6

 

細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋比例	平均期望值(%)	范圍（%）
1:02	97.1	90.3-100.8
1:04	98.6	96.7-101.8
1:08	91.4	86.5-100.5
1:16	88.4	82.7-99.4

6. 樣本值

應(yīng)用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。

樣本類型	樣本數(shù)目	平均值（pg/mL）	樣本值（pg/mL）
血清	8	17.5	7.9-29.4
血漿	8	12.7	3.8-23.2
細(xì)胞培養(yǎng)上清	4	n.d.	n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內(nèi)得15.63 pg/mL

7. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子。下述因子進(jìn)行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。

Recombinant human:		Recombinant Mouse:
IL-1α	CNTF	IL-1β	β-NGF
IL-1β	β-NGF	IL-2	NGF R
IL-2	NGF R	IL-4	NT-4
IL-4	NT-3	IL-6	TrkB
IL-5	NT-4	IL-10	TrkC
IL-6	TrkA	IL-12
IL-8	TrkB
IL-10	TrkC
IL-12