Deoxyribonuclease I(DNase I) from bovine pancreas 脫氧核糖核酸酶I,來源于牛胰腺
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
脫氧核糖核酸酶I（DNase I），即Deoxyribonuclease I，一種發(fā)現(xiàn)于多種細(xì)胞和組織的核酸酶，屬核酸內(nèi)切酶，靶向切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產(chǎn)物最小為多聚四核苷酸。DNase可催化多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)（其切割速率受組蛋白影響）。最佳的工作范圍是pH7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保護(hù)酶使其不被水解。在Mg2+存在下，該酶可隨機(jī)識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn)；而在Mn2+存在的條件下，可同時(shí)識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動(dòng)物胰腺也是該酶的最主要的來源之一。
本品來自牛胰腺，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用于清除蛋白中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使標(biāo)記堿基插入DNA。本品以粉末形式供應(yīng)，酶活力≥2000 Kunitz Units/mg蛋白。
產(chǎn)品性質(zhì)
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CAS號（CAS NO.） |
9003-98-9 |
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分子量（Molecular Weight） |
~31 kDa |
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孔尼茨單位（Kunitz Units） |
≥2000Kunitz Units/mg protein |
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類型（Type） |
Type IV |
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最佳PH（Optimal pH） |
7～8 |
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外觀（Appearance） |
白色至淺黃色粉末 |
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純度（Purity） |
Protein: ≥80% by Biuret |
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激活劑（Activators） |
多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+, Ca2+, Co2+, and Zn2+ |
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抑制劑（Inhibitors） |
β-巰基乙醇；螯合劑；SDS；肌動(dòng)蛋白 |
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活力單位定義（Unit Definition） |
25℃，pH5.0條件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個(gè)酶活力單位（Kunitz unit）。 |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。凍干粉末于-20℃保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
DNase Ⅰ儲(chǔ)存溶液
20 mM sodium acetate（pH 6.5），5 mM CaCl2，0.1 mM PMSF，50%甘油。
DNase Ⅰ失活或抑制
加入EDTA至終濃度為2.5 mM后，65℃加熱10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達(dá)到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100 mM以上鹽濃度均對DNase Ⅰ有顯著抑制作用。
使用方法（應(yīng)用于蛋白提取實(shí)驗(yàn)，僅供參考）
1）反應(yīng)體系：蛋白提取液中按照1/100體積加入DNase I儲(chǔ)存液（使其終濃度為20 U/mL），1/100體積加入1 M MgCl2。
2）反應(yīng)條件：37℃，30-60 min。繼續(xù)后續(xù)蛋白提取實(shí)驗(yàn)即可。
【注】：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否則會(huì)降低DNase I的消化能力。
HB210721
