Human Angiopoietin-like 4 ELISA Kit 人血管生成素類似物4 ELISA檢測(cè)試劑盒
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
人血管生成素類似物4（Human Angiopoietin-like 4）是由肝臟及脂肪組織分泌的分子量為55 kDa的糖蛋白，它與血管生成素的結(jié)構(gòu)有關(guān)。該分子N端含有卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域，C端為纖維蛋白原樣結(jié)構(gòu)域，可在體內(nèi)直接水解。成熟的人血管生成素類似物4與人血管生成素類似物1、2、3、5、6、7的氨基酸序列同源性為26% - 30%，與小鼠和大鼠的氨基酸序列同源性為75%。N端的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域未被糖基化，能夠形成二硫鍵，該結(jié)構(gòu)域可直接抑制脂蛋白脂肪酶的活性，從而提高體內(nèi)循環(huán)的甘油三酯水平。N端結(jié)構(gòu)域的功能為血管生成抑制劑，而C端結(jié)構(gòu)域通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附提高角質(zhì)細(xì)胞的遷移及創(chuàng)傷修復(fù)，除此之外，人血管生成素類似物4還可提高造血干細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞的存活能力。
翌圣Human Angiopoietin-like 4 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，用于定量測(cè)定血清、血漿中的人血管生成素類似物4(Human Angiopoietin-like 4)。特異性抗人血管生成素類似物4抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本，經(jīng)過(guò)孵育，樣本中存在的人血管生成素類似物4與固相抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入檢測(cè)抗體孵育結(jié)合，經(jīng)洗滌，再加入酶結(jié)合物(Streptavidin-HRP)孵育結(jié)合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中人血管生成素類似物4的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm 波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570 - 630 nm)測(cè)定吸光度值。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
97002ES48 / 97002ES96 |
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規(guī)格 |
48 T / 96 T |
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檢測(cè)范圍 |
0.63-40 ng/mL |
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檢測(cè)方法 |
雙抗夾心法 |
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檢測(cè)物種 |
人 |
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檢測(cè)時(shí)長(zhǎng) |
5小時(shí) |
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靈敏度 |
0.056 ng/mL |
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稀釋線性 |
76.1 - 122.0% |
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回收率 |
83.7 - 108.3% |
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板內(nèi)差 |
3.5% |
|
板間差 |
4.5% |
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
- 標(biāo)曲數(shù)據(jù)
數(shù)據(jù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，生成的標(biāo)曲用于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析。
- 靈敏度檢測(cè)
人血管生成素類似物4的最低檢測(cè)限為0.056 ng/mL，通過(guò)使用重復(fù)檢測(cè)20次零孔OD值的均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。
- 精密度檢測(cè)
酶標(biāo)板內(nèi)精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板內(nèi)重復(fù)測(cè)定20次，評(píng)估酶標(biāo)板內(nèi)的精密度。
酶標(biāo)板間精密度
3個(gè)已知濃度的樣本酶標(biāo)板間重復(fù)檢測(cè)36次，評(píng)估酶標(biāo)板間的精密度。
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項(xiàng)目 |
板內(nèi)精密度 |
板間精密度 |
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樣本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
|
平均值 |
1.1 |
4.8 |
20.0 |
1.2 |
4.9 |
20.3 |
|
標(biāo)準(zhǔn)差 |
0.06 |
0.11 |
0.51 |
0.08 |
0.17 |
0.65 |
|
變異系數(shù)（%） |
5.5 |
2.3 |
2.5 |
6.8 |
3.5 |
3.2 |
- 回收率檢測(cè)
通過(guò)不同水平的人促血管生成素配體4添加于樣本中來(lái)測(cè)定回收率，其回收率如下:
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樣本類型 |
平均回收率(%) |
范圍（%） |
|
血清 |
100.2 |
96.2-108.3 |
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血漿 |
91.3 |
83.7-102.1 |
- 稀釋線性檢測(cè)
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血清稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
101.8 |
101.4-102.6 |
|
1:04 |
105.3 |
102.4-109.3 |
|
1:08 |
100.2 |
96.5-107.3 |
|
1:16 |
102.1 |
88.2-122.0 |
|
血漿稀釋比例 |
平均期望值(%) |
范圍（%） |
|
1:02 |
93.8 |
89.6-98.7 |
|
1:04 |
95.7 |
89.3-98.6 |
|
1:08 |
91.2 |
84.5-97.5 |
|
1:16 |
81.5 |
76.1-85.0 |
- 樣本值
應(yīng)用本試劑盒，檢測(cè)若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
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樣本類型 |
樣本數(shù)目 |
平均值（ng/mL） |
樣本值（ng/mL） |
|
血清 |
10 |
120.5 |
77.5-202.3 |
|
EDTA血漿 |
10 |
175.4 |
47.2-739.4 |
|
枸櫞酸鈉血漿 |
10 |
106.2 |
46.1-330.7 |
- 測(cè)定特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組人血管生成素類似物4。下述因子進(jìn)行了特異性的評(píng)估，沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)和干擾影響。
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Recombinant human: |
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Ang-1 |
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Ang-2 |
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ANGPTL3 |
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ANGPTL4 |
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Tie-2/Fc Chimera |
檢測(cè)簡(jiǎn)圖
疑問(wèn)解答
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問(wèn)題 |
造成原因 |
解決方法 |
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標(biāo)曲不好 |
移液量不準(zhǔn)確 |
檢查移液器，按時(shí)校準(zhǔn)，仔細(xì)操作，充分混勻時(shí)蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
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稀釋方法不恰當(dāng) |
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顯色值偏低 |
孵育時(shí)間太短 |
給予足夠的孵育時(shí)間，樣本和溶解的標(biāo)準(zhǔn)品隔夜后更換。 |
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移液量不足或稀釋不當(dāng) |
校準(zhǔn)移液器和規(guī)范操作 |
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CV偏高 |
酶標(biāo)板清洗不當(dāng) |
使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機(jī)，檢查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
準(zhǔn)備新鮮洗液 |
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靈敏度較低 |
試劑盒儲(chǔ)存不當(dāng) |
按照產(chǎn)品組分表進(jìn)行保存。 |
