產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
Hieff® Taq DNA Polymerase是嗜熱性Thermus aquaticus表達(dá)的熱穩(wěn)定重組型DNA聚合酶，分子量為94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，無3’→5’外切酶活性。擴(kuò)增產(chǎn)物具有3’-dA，可直接用于TA克隆。
產(chǎn)品組分
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編號 |
組分 |
產(chǎn)品編號/規(guī)格 |
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10101ES80（1,000 U） |
10101ES92（10,000 U） |
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10101-A |
10×Taq Buffer (Mg2+ Free) |
4×1 mL |
4×10 mL |
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10101-B |
25 mM MgCl2 |
2×1 mL |
2×10 mL |
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10101-C |
Hieff® Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
200 μL |
2×1 mL |
產(chǎn)品應(yīng)用
基因型鑒定、菌落PCR等常規(guī)PCR。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
RNase殘留檢測：10 U本品和0.5 μg 293T細(xì)胞總RNA，37℃下孵育1 h，RNA的電泳譜帶無變化。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
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組分 |
體積（μL） |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 |
- |
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10×Taq Buffer (Mg2+ Free) |
5 |
1× |
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25 mM MgCl2 |
3 |
1.5 mM |
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dNTP Mix (10 mM each) |
1 μL |
0.2 mM |
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模板DNA |
optional |
- |
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引物1(10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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引物2(10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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Hieff® Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
0.4 μL |
0.04 U/μL |
【注】:1）Mg2+ 終濃度：Mg2+最佳濃度為1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM為間隔向上摸索Mg2+最佳使用濃度。
2）聚合酶添加：室溫下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，為了防止非特異性擴(kuò)增，建議將聚合酶在最后一步加到反應(yīng)體系中。
3）聚合酶濃度：推薦使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之間進(jìn)行優(yōu)化。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
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模板種類 |
擴(kuò)增片段 |
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基因組DNA |
50 ng-100 ng |
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質(zhì)粒DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL（不超過反應(yīng)體系的1/10） |
PCR擴(kuò)增程序
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循環(huán)步驟 |
溫度（ºC） |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
94 |
30 sec-5 min |
1 |
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變性 |
94 |
30 sec |
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退火 |
50-60 |
30 sec |
35 |
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延伸 |
72 |
60 sec/kb |
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終延伸 |
72 |
10 min |
1 |
【注】: 1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用94℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止DNA發(fā)生降解。
HB220701
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