產(chǎn)品簡介

核糖核酸酶A（Ribonuclease A，常用縮寫RNase A），一種含4個二硫鍵的單鏈多肽，分子量約為13.7 kDa（氨基酸序列）。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶（endoribonuclease），特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）殘基。具體來說，切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團(tuán)形成的磷酸二酯鍵，從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對應(yīng)的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG）。RNase A切割單鏈RNA活性最高，推薦工作濃度為1-100 μg/mL，兼容于各種反應(yīng)體系。低鹽濃度（0-100 mM NaCl），可用來切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而，高鹽濃度（≥0.3 M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

核糖核酸酶A（RNase A）最常見的應(yīng)用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA，此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一，可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來滅活DNase活性。另外，本品還可用于RNA酶保護(hù)分析、RNA序列分析等分子生物學(xué)實驗。

 

產(chǎn)品信息

貨號	10407ES60 /10407ES80 / 10407ES05/ 10407ES10
規(guī)格	100 mg / 1 g / 5 g /10 g

 

儲存條件

冰袋運輸。-25~-15℃干燥保存，有效期2年。

 

使用說明

【注】：此為RNase A儲存液配制的常用方法之一，也可以根據(jù)實驗室傳統(tǒng)的方法，或者參考文獻(xiàn)資料使用其他方法制備儲存液（如直接溶于10 mM Tris-Cl, pH7.5；或者Tris-NaCl溶液）。

1）利用10 mM的醋酸鈉（pH5.2）制備10 mg/mL 的RNase A 儲存液；

2）100℃加熱15 min；

3）冷卻到室溫，加入1/10體積的1 M Tris-HCl（pH7.4），調(diào)其pH至7.4（例如，5 mL 10 mg/mL的RNase 儲存液加入500 μL 1 M Tris-HCl, pH7.4）；

4）分裝于-25~-15℃℃凍存，可穩(wěn)定保存長達(dá)2年。

【注】：在中性條件下煮沸RNase A溶液，會有RNase沉淀形成；在更低的pH下將其煮沸，如有沉淀可以觀察到，可能由于蛋白雜質(zhì)存在造成。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀，可通過高速離心（13,000 rpm）去除雜質(zhì)，然后分裝凍存。

 

產(chǎn)品性質(zhì)  

中文別名（Chinese Synonym）	核糖核酸 3’-嘧啶寡核苷酸水解酶；核糖核酸酶I；胰核糖核酸酶
英文別名（English Synonym）	Ribonuclease I；Pancreatic ribonuclease；Ribonuclease 3’-pyrimidinooligonucleotidohydrolase；RNase A；Endoribonuclease I
CAS號（CAS NO.）	9001-99-4
外觀（Appearance）	白色凍干粉末
分子量（Molecular Weight）	~13.7 kDa（氨基酸序列）
最佳PH（Optimal pH）	7.6 (活性范圍 6–10)
最適溫度（Optimal temperature）	60℃（活力范圍15-70℃）
激活劑（Activator）	鈉鹽、鉀鹽等
抑制劑（Inhibitor）	核酸酶抑制劑
失活方法（Inactivation）	加熱不會失活，建議用離心柱或者酚氯仿抽提來充分去除
來源（Source）	牛胰腺
溶解性（Solubility）	溶于水（10 mg/mL）
干燥失重（Loss on drying）	≤5.0%
酶活力（Activity）	≥60 Kunitz units/mg
等電點（Isoelectric point）	9.6

 

注意事項

1）本品在生產(chǎn)過程中已經(jīng)過相應(yīng)方法去除DNase污染，對于常規(guī)質(zhì)粒DNA或者基因組DNA抽提（不需要嚴(yán)格定量DNA水平）的應(yīng)用，可不需要高溫煮沸，直接配制母液即可。對于需要嚴(yán)格控制DNase酶殘留的實驗，建議高溫煮沸或者購買DNase-free, protease-free的RNase A溶液（10 mg/mL）（貨號：10405ES03）。

2）RNase A會強吸附在玻璃器皿上，建議溶液裝到塑料離心管內(nèi)。

3）對于同時操作完整RNA實驗的研究人員，一定要謹(jǐn)防RNase A引入干擾試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5) 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

Ver.CN20240703