產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。

此外，本品以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，具有更高的物理化學(xué)特性，可以耐受更高的壓力，在相對(duì)較高的流速下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化，更適于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化。

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產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	20515ES08/20515ES25
規(guī)格	5 mL /25 mL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

基質(zhì)（Matrix）	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
配體（Ligand）	糊精
粒徑（Bead size）	45-165 µm
載量（Capacity）	>10 mg MBP蛋白（80 kDa）/mL基質(zhì)
最大壓力（PressureMax）	0.3 MPa，3 bar
pH穩(wěn)定范圍（pH range）	3-12
儲(chǔ)存緩沖液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS

 

儲(chǔ)存條件

 

2~8℃保存，有效期2年。

 

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4

洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麥芽糖, pH7.4

【注】平衡/洗雜緩沖液或洗脫緩沖液中可加入1 mM DTT 或 10 mM β-巰基乙醇。

使用說(shuō)明

【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1. MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的裝填（適用于各種中壓色譜層析柱的填裝）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無(wú)氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

2）將樹(shù)脂懸浮起來(lái)，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。

3）如果使用儲(chǔ)液器，應(yīng)立即在層析柱和儲(chǔ)液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。

4）打開(kāi)層析柱底部出口，開(kāi)起泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過(guò)層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對(duì)所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的最大流速，這樣也可以得到一個(gè)很好的裝填效果。

【注】：在隨后的色譜程序中，不要超過(guò)最大裝柱流速的75%，當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。

5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。

6）如果使用儲(chǔ)液器，去除儲(chǔ)液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開(kāi)始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。

2. 樣品純化

1）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡柱子，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）上樣：Resin平衡后，加入蛋白樣品，使其與Resin充分接觸，提高目的蛋白回收率，收集流出液。

3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜緩沖液進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫緩沖液，收集洗脫液，即目的蛋白溶液。

5）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

3. SDS-PAGE檢測(cè)

將純化過(guò)程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測(cè)，判定其純化效果。

4.填料清洗

MBP標(biāo)簽蛋白純化產(chǎn)品可以重復(fù)使用而無(wú)需再生，但隨著非特異結(jié)合蛋白的增多和蛋白的聚集，會(huì)造成流速和結(jié)合載量性能下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1）3倍柱體積的去離子水；

2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液；

3）3倍柱體積去離子水；

4）填料清洗后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2. MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3. 所有操作過(guò)程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
6.  

附表 問(wèn)題及解決方案

問(wèn)題	可能原因	推薦解決方案
柱子反壓過(guò)高	填料被堵塞	清洗樹(shù)脂
		裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過(guò)濾，或離心去除
洗脫組分中無(wú)目的蛋白	目的蛋白未表達(dá)	優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，確保目的蛋白表達(dá)
	樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑	樣品透析或用平衡buffer稀釋
	細(xì)胞產(chǎn)生大量的淀粉酶影響結(jié)合力	培養(yǎng)基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表達(dá)
	融合蛋白使麥芽糖結(jié)合位點(diǎn)阻塞或扭曲影響了目的蛋白的結(jié)合力	更換載體
	柱子結(jié)合時(shí)間太短	將樣品與樹(shù)脂振蕩孵育4℃，2h或更長(zhǎng)時(shí)間
洗脫樣品較雜	目的蛋白降解	加一些蛋白酶抑制劑，如PMSF、EDTA等
	平衡/洗雜不充分	增加平衡液體積，確保樹(shù)脂充分平衡/洗雜。

 

Ver.CN20231117