Tth DNA Polymerase是一種從嗜熱菌Thermus thermophilus HB8中發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶。在Mg²⁺存在的條件下，該酶具有5′-3′ DNA聚合酶活性和5′-3′ 核酸外切酶活性，無3′-5′ 核酸外切酶活性，可廣泛用于PCR擴(kuò)增反應(yīng)。在Mn²⁺存在的條件下，該酶在55-70℃條件下表現(xiàn)出較強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄活性，可用于一步法RT-PCR反應(yīng)。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		14607ES72 (250 U)	14607ES80 (1250 U)
14607-A	Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	50 μL	250 μL
14607-B	5×Tth RT-PCR Buffer	1 mL	4×1.25 mL
14607-C	10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)	500 μL	2×1.25 mL
14607-D	50mM Mg(OAc)2	250 μL	1.25 mL
14607-E	dNTP Mixture (10 mM each)	150 μL	750 μL

 

運輸與保存方法

干冰運輸。-20℃以下儲存，有效期2年。

 

單位定義

用活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，在 74℃，30 分鐘內(nèi)，攝入 10 nmol 的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 個活性單位（U）。

 

注意事項

1）Buffer 在融解時，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請顛倒混勻后使用。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

推薦PCR反應(yīng)操作流程：

1、反應(yīng)體系配制

組分	體積（μL）
10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)	5
Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5
dNTP Mixture (10 mM each)	1
上游 Primer 10μM	2
下游 Primer 10μM	2
Template DNA	50 pg- 1μg
ddH2O	to 50

【注】：可根據(jù)具體實驗調(diào)整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2、PCR反應(yīng)程序

循環(huán)步驟	溫度（ºC）	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94	30 sec-5 min	1
變性	94	30 sec
退火	50-70	30 sec	35
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

【注】：可根據(jù)具體實驗調(diào)整反應(yīng)條件。

推薦RT-PCR反應(yīng)操作流程：

1、反應(yīng)體系配制

組分	體積（μL）
5×Tth RT-PCR Buffer	10
Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	1.5
50mM Mg(OAc)2	2.5
dNTP Mixture (10 mM each)	1.5
上游 Primer 10μM	2
下游 Primer 10μM	2
Template RNA	50 pg- 1μg
ddH2O	to 50

【注】：可根據(jù)具體實驗調(diào)整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2、RT-PCR反應(yīng)程序

循環(huán)步驟	溫度（ºC）	時間	循環(huán)數(shù)
逆轉(zhuǎn)錄	55-70	30 min	1
預(yù)變性	94	30 sec-5 min	1
變性	94	30 sec
退火	50-70	30 sec	35
延伸	72	60 sec/kb
終延伸	72	10 min	1

【注】：可根據(jù)具體實驗調(diào)整反應(yīng)條件。

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