High Sieving Agarose 高分辨率瓊脂糖(PCR級(jí))
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產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
瓊脂糖（Agarose）是純化的線性半乳聚糖親水膠體，提取自瓊脂或者含瓊脂的海藻，結(jié)構(gòu)上是一種線性聚合物，由β-D-吡喃半乳糖（1-4）連接3,6-脫水α-L-吡喃半乳糖基構(gòu)成。作為一種凝膠試劑，常用于通過(guò)凝膠電泳或者印跡法（如Northern或Southern）來(lái)進(jìn)行日常核酸分析，也適用于蛋白應(yīng)用，如輻射狀免疫擴(kuò)散（RID）實(shí)驗(yàn)。
本品為PCR級(jí)高分辨率瓊脂糖，對(duì)PCR產(chǎn)物、小片段DNA具有較高的分辨率，適宜分離20 bp-800 bp的DNA片段，其分離效果可與聚丙烯酰胺相媲美。此外，還具有如下特點(diǎn)：
- 易溶解，膠液更清澈，可以配制高達(dá)5%的凝膠；
- 很低的背景；
- 品質(zhì)穩(wěn)定等。
瓊脂糖的基本參數(shù)，包括：
1）硫酸鹽含量（sulfate content）——純度指標(biāo)，因?yàn)榱蛩岣谴嬖诃傊莾?nèi)的主要離子基團(tuán)；
2）凝膠強(qiáng)度（gel strength）——施加于凝膠使之?dāng)嗔训耐饬Γ?/font>
3）膠凝點(diǎn)（Gel point）——水溶性瓊脂糖溶液冷卻后形成凝膠時(shí)的溫度。液體向凝膠轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，瓊脂糖溶液具有滯后性，因此，膠凝點(diǎn)不等同于膠熔點(diǎn)；
4）電滲（EEO）——液體穿透凝膠的一種電動(dòng)運(yùn)動(dòng)。瓊脂糖凝膠內(nèi)的陰離子基團(tuán)吸附在基質(zhì)上不會(huì)發(fā)生遷移，但是解離的陽(yáng)離子就會(huì)朝負(fù)極遷移，從而產(chǎn)生電滲。由于生物聚合物的電泳遷移通常是朝負(fù)極運(yùn)動(dòng)，則EEO產(chǎn)生的內(nèi)部對(duì)流會(huì)干擾分離效率。
儲(chǔ)存條件
室溫干燥保存，有效期5年。
注意事項(xiàng)
- 可用煮沸或微波加熱的方法來(lái)熔膠，瓊脂糖熔化必須徹底！此時(shí)瓊脂糖膠液清澈，否則，會(huì)造成電泳圖像模糊不清。熔膠可能會(huì)引起暴沸，需注意防止?fàn)C傷。微波爐中加熱時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
- 用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須是相同的。
- 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途！
產(chǎn)品性質(zhì)
|
CAS號(hào)（CAS NO.） |
39346-81-1 |
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外觀（Appearance） |
白色至類白色粉末 |
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凝膠強(qiáng)度（Gel Strength, 1.5%） |
≥750 (g/cm2) |
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凝膠溫度（Gel Point, 1.5%） |
≤33℃ |
|
熔膠溫度（Melting Point, 1.5%） |
≤70℃ |
|
電滲值（EEO, -mr） |
≤0.10 |
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硫酸鹽（Sulfate, %） |
≤0.10% |
|
水分（Moisture） |
≤10% |
|
灰分（Ash Content） |
≤0.5% |
|
DNA酶（DNase） |
None Detected |
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RNA酶（RNase） |
None Detected |
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蛋白酶（Protease） |
None Detected |
|
核酸內(nèi)切酶（Endonuclease） |
None Detected |
使用說(shuō)明
凝膠制備方法
1. 配制適量電泳及制膠用的緩沖液（根據(jù)電泳需要，配制合適濃度的電泳及制膠緩沖液），倒入合適三角瓶中。
*用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須是相同的。
- 根據(jù)制膠量及凝膠濃度，加入準(zhǔn)確稱量的瓊脂糖粉（總液體量不宜超過(guò)三角錐瓶的50%容量）。
- 在微波爐中加熱溶解瓊脂糖，設(shè)置中火加熱至沸騰，保持膠液沸騰約30 sec，戴上防熱手套，移開(kāi)三角錐瓶，小心搖動(dòng)三角錐瓶，重懸未溶解顆粒，再次用高火加熱1 min（或加熱直至瓊脂糖完全溶解）。請(qǐng)戴上防熱手套，小心搖動(dòng)三角錐瓶，使瓊脂糖膠液充分均勻。
*必須保證瓊脂糖充分完全溶解，此時(shí)瓊脂糖膠液清澈，否則，會(huì)造成電泳圖像模糊不清。加熱時(shí)如膠液劇烈沸騰發(fā)泡，停止加熱。微波爐中加熱時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
- 使溶液冷卻至60℃左右，加入翌圣YeaRed核酸染料（Cat#10202ES，適用于紫外）或YeaGreen（Cat#10204ES，適用于藍(lán)光），使用終濃度為1×（即每50 mL瓊脂糖溶液中加入5 μL YeaRed/YeaGreen 10,000×水溶液）。
- 將含有YeaRed/YeaGreen核酸染料瓊脂糖溶液倒入制膠模具中，在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度一般在3-5 mm之間。
- 在室溫下使膠凝固（大約30 min-1 h），然后放置于電泳槽中進(jìn)行電泳。
*凝膠不立即使用時(shí)，請(qǐng)用保鮮膜將凝膠包好后在4℃下保存，一般可保存2～5天。
- 按照常規(guī)方法上樣并電泳。
- 紫外拍照觀察。
瓊脂糖濃度與DNA分離范圍
|
線性DNA片段大?。╞p） |
20-250 bp |
50-500 bp |
100-1200 bp |
500-2000 bp |
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瓊脂糖濃度（%） |
5.0 |
4.0 |
3.0 |
2.0 |
Ver.CN20250212
