離子交換主要包括強(qiáng)陽離子交換、弱陽離子交換、強(qiáng)陰離子交換和弱陰離子交換4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。CM弱陽離子交換層析填料FF以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為基架，可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性，適合實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品帶電基團(tuán)-O-CH₂COO^–。本品CM弱陽離子交換預(yù)裝柱是CM弱陽離子交換層析填料FF的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格為5 mL，該預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作。

 

產(chǎn)品性質(zhì)

基質(zhì)	高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球
粒徑	45-165 µm
離子交換類型	弱陽離子
載量	～0.09-0.13 mmol H+/mL 基質(zhì)
耐壓	0.3 MPa
建議流速	300-600 cm/h
pH范圍	4-13（長(zhǎng)期）/ 2-14（短期）
儲(chǔ)存緩沖液	20%乙醇
柱子尺寸	1.6×2.5 cm（5 mL）

 

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。2-8℃保存，有效期2年。

 

使用方法

1 緩沖液的準(zhǔn)備

應(yīng)選擇緩沖基團(tuán)不與介質(zhì)作用的緩沖鹽，平衡緩沖液宜采用低鹽和低 pH（通常低于目的物等電點(diǎn) 1 個(gè) pH 單位）緩沖液以有利于目的物的結(jié)合，同時(shí)需要考慮目的物在緩沖液中的穩(wěn)定性。洗脫緩沖液通常為在平衡緩沖液中加入高濃度鹽（如 1M NaCl）的緩沖液或高 pH 洗脫。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。

表1：陽離子交換緩沖液

pH 范圍	緩沖鹽	濃度（mM）	平衡離子	pKa(25℃)
1.4-2.4	Maleic acid	20	Na+	1.92
2.6-3.6	Methyl malonic acid	20	Na+或 Li+	3.07
2.6-3.6	Citric acid	20	Na+	3.13
3.3-4.3	Lactic acid	50	Na+	3.86
3.3-4.3	Formic acid	50	Na+或 Li+	3.75
3.7-4.7	Succinic acid	50	Na+	4.21
4.3-5.3	Acetic acid	50	Na+或 Li+	4.75
5.1-6.1	Succinic acid	50	Na+	5.64
5.2-6.2	Methyl malonic acid	50	Na+或 Li+	5.76
5.6-6.6	MES	50	Na+或 Li+	6.27
6.7-7.7	PhoCMhate	50	Na+	7.20
7.0-8.0	HEPES	50	Na+或 Li+	7.56
7.8-8.8	BICINE	50	Cl-	8.33

 

2 樣品準(zhǔn)備

樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

3 樣品純化

1）將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口，將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中，并旋緊。

2）用3-5倍柱體積的去離子水沖洗出存儲(chǔ)緩沖液。

3）使用至少5倍柱床體積的結(jié)合Buffer平衡色譜柱。

4）利用泵或注射器上樣。

【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少也會(huì)導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。

5）用洗雜Buffer沖洗柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線（一般至少10-15個(gè)柱體積）。

6）用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液就足夠了。可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。

5 填料清洗

離子交換填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換填料可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時(shí)可按照下面方法對(duì)填料進(jìn)行清洗。

1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)

用2倍柱體積的1 M NaOH溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)

用3-4倍柱體積的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

 

注意事項(xiàng)

1）請(qǐng)勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2）為了得到良好的分離效果，避免緩沖液與層析柱有太大溫差變化。

3）層析柱可以放在層析冷柜中使用，但是需要適當(dāng)降低流速。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

附表 問題及解決方案

問題	可能原因	推薦解決方案
柱子反壓過高	填料被堵塞	按照【填料清洗】部分對(duì)填料進(jìn)行清洗。
		樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22 µm或0.45   µm濾膜過濾。
洗脫樣品較雜	填料重復(fù)多次使用	按照【填料清洗】部分對(duì)填料進(jìn)行清洗或更換新填料。
	平衡不充分	增加平衡液體積，確保填料充分平衡/洗雜。

 

HB220708