離子交換樹脂主要包括強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的分離純化。
本品Q強(qiáng)陰離子交換樹脂以高度交聯(lián)的6%瓊脂糖為介質(zhì)，可耐受較高的流速及更高的化學(xué)穩(wěn)定性，適合實驗室及工業(yè)大規(guī)模純化。本品帶電基團(tuán)-N+(CH3)3。
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì)（Matrix） |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
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粒徑（Bead size） |
45-165 µm |
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離子交換類型（Type） |
強(qiáng)陰離子 |
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載量（Capacity） |
0.18-0.25mmol Cl-/mL 介質(zhì) |
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流速（Flow Rate） |
300-700 cm/h |
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pH范圍（pH Range） |
2-12（長期）/ 2-14（短期） |
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儲存緩沖液（Buffer） |
20%乙醇 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。2-8℃保存，有效期5年。
使用方法
1 緩沖液的準(zhǔn)備
所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。
2 樣品準(zhǔn)備
樣品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。
3 裝柱（使用儲液器裝填）
1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。
2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。
3）如果使用儲液器，應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。
4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的最大流速， 這樣也可以得到一個很好的裝填效果（【注】在隨后的色譜程序中，不要超過最大裝柱流速的75%）。當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。
5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。
6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。
7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。
8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。
4 樣品純化
1）將介質(zhì)裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的結(jié)合Buffer進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。
2）將樣品加到平衡好的Q Agarose 6FF中（保證目的蛋白與填料充分接觸，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5）依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細(xì)菌污染。
5 SDS-PAGE 檢測
將得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測純化效果。
6 填料清洗
離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強(qiáng)度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer 進(jìn)行平衡至離子強(qiáng)度或pH值穩(wěn)定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
離子交換樹脂可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著非特異性結(jié)合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進(jìn)行清洗。
1）去除一些沉淀或變性物質(zhì)
用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)
用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些離子鍵結(jié)合物質(zhì)
用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2）填料使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途！
附表 問題及解決方案
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問題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
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柱子反壓過高 |
填料被堵塞 |
按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗。 |
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樣品中含有微小的固體顆粒，建議使用前用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾。 |
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洗脫樣品較雜 |
樹脂重復(fù)多次使用 |
按照【填料清洗】部分對樹脂進(jìn)行清洗或更換新樹脂。 |
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平衡不充分 |
增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜。 |
HB220629
