Hieff Canace? Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (1 U/μL)
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase是一種基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，針對(duì)復(fù)雜的模板也能快速準(zhǔn)確的完成PCR反應(yīng)。其保真性顯著提高，且解決了常規(guī)高保真酶無法以dUTP為原料進(jìn)行聚合反應(yīng)、無法使用含有dUTP的擴(kuò)增引物以及無法使用含有dUTP的DNA作為擴(kuò)增模板等諸多問題。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化后的酶緩沖液，添加了PCR增強(qiáng)組分，使得該酶具有極強(qiáng)的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性，適合復(fù)雜模板的擴(kuò)增。其擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 |
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10145ES60 |
10145ES76 |
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10145-A |
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA Polymerase(1 U/μL) |
100 μL |
500 μL |
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10145-B |
2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
3×1 mL |
15×1 mL |
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20°C保存，有效期1年。
產(chǎn)品應(yīng)用
使用含dUTP的引物進(jìn)行高保真文庫擴(kuò)增；
使用含dUTP的模板進(jìn)行高保真文庫擴(kuò)增；
使用含dUTP的dNTP進(jìn)行高保真文庫擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase與常規(guī)高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，請務(wù)必仔細(xì)閱讀使用說明。
1. 推薦反應(yīng)體系
所有操作應(yīng)于冰上進(jìn)行，2×Canace® Uracil+ PCR buffer解凍后請充分混勻。體系配置之前請預(yù)熱PCR儀，各組分添加完成之后用移液器吸打充分混勻并短暫離心至管底，然后置于預(yù)熱的PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。所有組份使用完畢之后及時(shí)放回-20 °C保存。
表1. PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系
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組分 |
體積 (µL) |
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模板DNA |
X |
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2×Canace® Uracil+ PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 |
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正向引物 (10-25 μM） |
1-2.5 |
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反向引物 (10-25 μM） |
1-2.5 |
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Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL） |
1 |
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ddH2O |
Total to 50 |
【注】：
1) 模板：使用純化后的高質(zhì)量DNA模板可以顯著提高擴(kuò)增效率和成功率。
2) dNTPs：反應(yīng)體系中dNTPs使用終濃度為200 μM。試劑盒中提供的dNTPs中不含dUTP，如特殊情況下需要制備含dUTP的模板，可自行額外添加dUTP至終濃度為400 μM。
3) 聚合酶濃度：在50 μL體系中，推薦使用1 U，可以在0.5-2 U之間進(jìn)行優(yōu)化，請勿超過2 U。為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應(yīng)體系中。
4) Mg2+終濃度：反應(yīng)體系中Mg2+終濃度為2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨詢，要求提供低Mg2+濃度或不含Mg2+的buffer。
2．推薦反應(yīng)程序
表2. PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序
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溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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98°C |
1 min |
1 |
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98°C |
10 sec |
1-15（根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求） |
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60°C |
30 sec |
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72°C |
30 sec |
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72°C |
5 min |
1 |
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4°C |
Hold |
- |
【注】：
1)預(yù)變性溫度推薦使用98°C。預(yù)變性推薦時(shí)間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；文庫為1 min；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2) 退火溫度推薦使用60°C，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時(shí)間為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3) 延伸溫度和時(shí)間：推薦使用72°C，延伸時(shí)間根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行調(diào)整。
HB221220
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