產(chǎn)品描述

 

螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中會(huì)發(fā)出波長為560 nm左右的生物螢光，該螢光可通過化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測定。檢測原理如圖所示：

 

 

圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit是一種輝光型螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒，具有高靈敏度和發(fā)光信號穩(wěn)定的特點(diǎn)，可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。

相對于閃光型Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit（Cat#.11401），本品具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）發(fā)光信號更穩(wěn)定性，為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供了更大的靈活性。2）采用加樣-混勻-檢測的操作方法，無需依賴自動(dòng)進(jìn)樣器，并且無需棄培養(yǎng)液、離心等步驟，大大的簡化了實(shí)驗(yàn)流程。3）無明顯刺激性氣味。

本試劑盒可用于多種常用細(xì)胞培養(yǎng)液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2h左右（22℃），滿足絕大多數(shù)高通量實(shí)驗(yàn)需求。

 

 

產(chǎn)品組分

 

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		11404ES60（100 T）	11404ES80（1000 T）
11404-A	輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液	10 ml	100 ml
11404-B	輝光型螢火蟲螢光素酶底物	1 vial	1 vial

 

運(yùn)輸與保存方式

 

干冰運(yùn)輸。未拆封試劑盒-20℃保存，有效期1年。

溶解分裝后的輝光型螢火蟲螢光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超過1個(gè)月。

 

 

使用說明

 

1.需自備的材料

單/多道移液器、不透光細(xì)胞培養(yǎng)白板、化學(xué)發(fā)光儀或帶化學(xué)發(fā)光檢測模塊的酶標(biāo)儀。

2.檢測試劑準(zhǔn)備

首次使用時(shí)將輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液一次性全部倒入輝光型螢火蟲螢光素酶底物瓶中，充分混勻后按使用需求分裝，建議-70℃長期保存或-20℃保存不超過一個(gè)月。分裝凍存后的檢測試劑，后續(xù)每次實(shí)驗(yàn)前需平衡至室溫。

注：輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液可以室溫或水浴融化，但溫度不能超過25℃。

3.操作步驟

1）從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出含哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)板，放置5-15 min，平衡至室溫。

2）加檢測試劑：加入與待測細(xì)胞培養(yǎng)液等體積并平衡至室溫的檢測試劑（例如，96孔板通常加入100 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入100 μl檢測試劑；384孔板通常加入30 μl培養(yǎng)液，相應(yīng)加入30 μl檢測試劑）。

3）振蕩混勻：為了使得細(xì)胞裂解充分，建議在水平搖床上室溫混勻5-10 min（注：不要用移液器吹吸混勻，產(chǎn)生的氣泡會(huì)影響發(fā)光檢測讀數(shù)。混勻時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以確保細(xì)胞充分裂解，得到穩(wěn)定的發(fā)光檢測結(jié)果）。

4）檢測：在化學(xué)發(fā)光檢測儀或帶化學(xué)發(fā)光模塊的多功能酶標(biāo)儀上檢測發(fā)光信號，加入檢測試劑后2 h內(nèi)完成檢測。

 

注意事項(xiàng)

 

1）反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將檢測試劑以及細(xì)胞培養(yǎng)液平衡至室溫（20-25℃）。

2）檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測得的光信號值也會(huì)不同。

3）檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光細(xì)胞培養(yǎng)白板。

4）檢測設(shè)置：Luminescence，350-700 nm，建議讀板時(shí)間設(shè)為0.5-1 sec。

5）發(fā)光信號會(huì)受到檢測環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測條件一致。

6）多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板檢測時(shí)，請盡量確保每板加入檢測溶液后孵育時(shí)間一致，以獲得最佳的檢測結(jié)果。

7）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。

 

 

HB220325