產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻
產(chǎn)品簡介
MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit適用于血漿、血清、淋巴液等樣品中總RNA和miRNA的提取。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料，配合本公司獨特的裂解液配方可以可最大限度的回收高純度RNA和miRNA。提取的RNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于RT-qPCR等下游應(yīng)用實驗。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
19332ES08 / 19332ES50 |
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規(guī)格 |
5 T /50 T |
組分信息
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類別 |
組分編號 |
組分名稱 |
19332ES08 |
19332ES50 |
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Part I |
19332-A |
裂解液LB (LB Buffer S3) |
5 mL |
50 mL |
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Part II |
19332-B |
RNA吸附柱S3 (MolPure® RNA Column S3) |
5 個 |
50 個 |
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19332-C |
miRNA吸附柱S3 (miRNA Column S3) |
5 個 |
50 個 |
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19332-D |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S3) |
10 個 |
100 個 |
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19332-E |
去蛋白液PL* (PL Buffer S3*) |
1.2 mL |
12 mL |
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19332-F |
漂洗液W* (Wash Buffer S3*) |
1.3 mL |
13 mL |
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19332-G |
RNase-free H2O |
1 mL |
5 mL |
儲存條件
Part I組分冰袋運輸，4℃避光保存。Part II組分常溫運輸，常溫保存。產(chǎn)品有效期12個月。
注意事項
1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影響使用。使用時，吸取上清即可。
3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物質(zhì)，為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用說明
使用前準備
1. 自備設(shè)備和試劑：臺式離心機、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴，氯仿、無水乙醇，RNase-free離心管等。
2. 除特殊指明外，所有的離心步驟均在室溫完成，使用可以達到12,000 rpm轉(zhuǎn)速的傳統(tǒng)臺式離心機。
3. 首次使用前，在去蛋白液PL* 和漂洗液W*瓶中參照下表加入指定體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。
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編號 |
組分名稱 |
5 T規(guī)格無水乙醇加入量 |
50 T規(guī)格無水乙醇加入量 |
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19332-E |
去蛋白液PL* |
2.8 mL |
28 mL |
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19332-F |
漂洗液W* |
5.2 mL |
52 mL |
操作方法
一、樣本預處理：
1. 取250 μL血清或血漿等液體樣本轉(zhuǎn)移至1.5 mL的RNase-free離心管中。
【注】：不足 250 μL時，需用PBS或生理鹽水補足。
2. 加入750 μL裂解液LB，反復吹打，并劇烈振蕩混勻。
3. 室溫（22-30℃）靜置5 min。
4. 加入200 μL 氯仿（自備），劇烈振蕩15 sec混勻。
5. 室溫靜置2 min。
6. 4℃ 12,000rpm 離心10 min，使樣品分層。取上層水相轉(zhuǎn)移至1.5 mL的RNase-free離心管中。
【注】：樣品會分為三層，下層為有機相，中間層和上層無色的水相，RNA存在于上層水相中。
【注】：上層容量約為所加裂解液LB總量的70%。如加入750 μL 裂解液LB，上層水相約為525 μL。建議吸取500 μL，以防吸到中間層造成DNA污染。
二、（推薦）總RNA（含miRNA）提取方法：
1. 將RNA吸附柱S3套入2 mL收集管中，備用。
2. 加入1.5倍上層水相體積的無水乙醇（自備）至上層水相，吹打混勻。
【注】：出現(xiàn)沉淀屬正?，F(xiàn)象。
【注】：無水乙醇必須是室溫保存。
3. 將上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉廢液。
【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。
【注】：離心后，若濾膜仍有液體殘留，可延長離心時間至5 min。
4. 加入700 μL去蛋白液PL*，12,000 rpm離心30 sec，棄廢液。
【注】：確保去蛋白液PL*已添加無水乙醇。
5. 將RNA吸附柱S3放回收集管，加入500 µL漂洗液W*，12,000 rpm室溫離心30 sec，棄廢液。
【注】：確保漂洗液W*已添加無水乙醇。
6. 重復一遍步驟5。
7. 將RNA吸附柱S3放回收集管，空柱12,000 rpm室溫離心2 min，以除去殘留的漂洗液W*。
8. 將RNA吸附柱S3放入新的1.5 mL RNase-free離心管中，在RNA吸附柱S3中央加入30-50 µL RNase-free H2O，室溫放置2 min。然后12,000 rpm離心1 min。收集濾液，即為RNA溶液。
【注】：可通過以下方式提高回收產(chǎn)量：①65℃預熱RNase-free H2O；②將RNA濾液再次上柱，室溫放置2 min后，洗脫。
9. RNA溶液可置于-80℃長期保存。
三、僅當miRNA提取量不理想時，可嘗試用miRNA富集方法：
1. 將RNA吸附柱S3和miRNA吸附柱S3分別套入2 mL收集管中，備用。
2. 加入0.5倍上層水相體積的無水乙醇（自備）至上層水相，吹打混勻。
【注】：無水乙醇必須是室溫保存。
3. 將上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，收集濾液。并將濾液轉(zhuǎn)移至新的RNase-free離心管中。
【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。
【注】：miRNA在濾液中，吸附柱上為去除miRNA的總RNA。
4. 計算濾液體積，加入0.65倍體積室溫保存的無水乙醇，吹打混勻。
5. 將上述混合物加入miRNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉濾液。
【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。
【注】：離心后，若濾膜仍有液體殘留，可延長離心時間至5 min。
6. 按照總RNA（含miRNA）提取方法步驟4~9漂洗，獲取miRNA。
【注】：此操作中，步驟4~9用到的離心柱應(yīng)為miRNA吸附柱S3。
Ver.CN20231114
