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      五代逆轉(zhuǎn)錄酶不含甘油Hifair? V Reverse Transcriptase(600 U/μL)
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻
                  
       
      產(chǎn)品簡介
      


       
      


      Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其熱穩(wěn)定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應(yīng)溫度，適合具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉(zhuǎn)錄。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
      


       
      


      產(chǎn)品信息
      


       
      


      
	
		
      
			
			
      貨號
      
			      		
			
			
      11301ES06 / 11301ES12 / 11301ES62/ 11301ES75 /11301ES96
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      規(guī)格
      
			      		
			
			
      3 KU / 12 KU / 120 KU / 300 KU / 3000 KU 
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      單位定義
      
			      		
			
			
      以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內(nèi)，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      組分信息
      


       
      


      
	
		
      
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      11301ES06
      
			      		
			
			
      11301ES12
      
			      		
			
			
      11301ES62
      
			      		
			
			
      11301ES75
      
			      		
			
			
      11301ES96
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)
      
			      		
			
			
      5 μL
      
			      		
			
			
      20 μL
      
			      		
			
			
      200 μL
      
			      		
			
			
      500 μL
      
			      		
			
			
      5 mL
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      儲存條件
      


       
      


      2~8℃保存，有效期6個月。
      


       
      


      使用說明
      


       
      


      第一鏈cDNA合成操作步驟
      


      1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結(jié)構(gòu)，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）
      


      
	
		
      
			
			
      組分
      
			      		
			
			
      使用量
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase free ddH2O
      
			      		
			
			
      to 13 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Oligo (dT)18 (50 μM)
      

			
      or Random Primers (50 μM)
      

			
      or Gene Specific Primers (2 μM)
      
			      		
			
			
      1 μL
      

			
      or 1 μL
      

			
      or 1 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      模板RNA
      
			      		
			
			
      Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng
      
			      		
		
      
	      

      


      65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后，加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，并輕輕吹打混勻。
      


       
      


      2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）
      


      
	
		
      
			
			
      組分
      
			      		
			
			
      使用量
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      上一步的反應(yīng)液
      
			      		
			
			
      13 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      5×Hifair® V Buffer
      
			      		
			
			
      4 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      dNTP Mix (10 mM)
      
			      		
			
			
      1 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)
      
			      		
			
			
      200 U
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase inhibitor (40 U/µL)
      
			      		
			
			
      1 μL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      RNase free ddH2O
      
			      		
			
			
      To 20 μL
      
			      		
		
      
	      

      


      3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
      


      
	
		
      
			
			
      溫度
      
			      		
			
			
      時間
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      25℃*
      
			      		
			
			
      5 min
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      42℃**
      
			      		
			
			
      15-30 min
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      85℃***
      
			      		
			
			
      5 min
      
			      		
		
      
	      

      


      *當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
      


      **逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-55℃。
      


      ***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
      


      逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
      


      該逆轉(zhuǎn)錄酶也適用于一步法RT-qPCR，推薦每25 μL反應(yīng)體系，添加10-20 U逆轉(zhuǎn)錄酶，也可根據(jù)實際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量。
      


       
      


      注意事項
      


       
      


      1. 請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。
      


      2. 所有操作均應(yīng)在冰上進行，防止RNA降解。
      


      3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。
      


      4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。
      


      5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
      


       
      


      Ver.CN20231116
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883