蛋白電泳經(jīng)常使用聚丙烯酰胺凝膠（PAGE凝膠）來實(shí)現(xiàn)蛋白分離，此類凝膠一般由濃縮膠和分離膠兩部分組成，前者起到將蛋白樣品進(jìn)行濃縮的作用，后者則是根據(jù)凝膠所使用的丙烯酰胺單體和N,N-亞甲基雙丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交聯(lián)劑的濃度不同從而分離不同大小范圍的蛋白質(zhì)。

本試劑盒適用于Tris-甘氨酸電泳體系，其中包括快速制備PAGE凝膠所需的各種試劑，用戶只需自備制膠設(shè)備即可配膠，大大簡化了制膠過程，此外，本品還具有以下特點(diǎn)：

1）制膠速度快——最少僅需2 min即可灌制多塊凝膠，無需計(jì)算所需溶液量，無需稀釋；

2）彩色濃縮膠——濃縮膠呈彩色，為點(diǎn)樣提供最大便利，所含顏色配方不影響電泳、染色及轉(zhuǎn)膜等后續(xù)應(yīng)用；

3）安全無異味——無需使用TEMED，避免接觸過硫酸銨粉末，遠(yuǎn)離有毒試劑；

4）穩(wěn)定性高——試劑盒配套提供的硫酸銨催化劑溶液屬改良型APS，其穩(wěn)定性和催化效能都得到大大提升。

5）一步法灌膠——可無需封閉分離膠，直接添加濃縮膠（請熟讀配膠步驟）。

本試劑盒所配制凝膠可用于變性PAGE凝膠電泳，也可用于非變性PAGE凝膠電泳。該規(guī)格可配制不同厚度的凝膠，配制數(shù)量分別為：0.75 mm厚度膠（約125塊）、1.00mm厚度膠（約90塊）、1.50mm厚度膠（約60塊）。

翌圣為您提供Western Blot實(shí)驗(yàn)整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購請參考：WB實(shí)驗(yàn)系列產(chǎn)品-選購指南

     【試劑盒操作指南視頻】

       PAGE凝膠快速制備試劑盒操作指南

 

產(chǎn)品信息

類別	編號	組分名稱	20325ES62（125 mini gels）	保存方式
Part Ⅰ	20325-A	10%-分離膠緩沖液	250 mL	2~8℃
	20325-B	10%-分離膠溶液	250 mL	2~8℃
	20325-C	10%-彩色濃縮膠緩沖液	80 mL	2~8℃
	20325-D	10%-濃縮膠溶液	80 mL	2~8℃
	20325-E	制膠杯	3個(gè)	2~8℃
Part Ⅱ	20325-F	改良型過硫酸銨溶液	8 mL	-25~-15℃

 

儲存條件

2~8℃保存。其中F組分改良型過硫酸銨溶液如果長時(shí)間不用，需保存于-25~-15℃。有效期1年。

 

使用說明：建議配膠時(shí)不要一次性配置太多塊膠，避免來不及添加上層液（推薦最多2-3塊）

1 根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度【參考附表1】

2 制膠流程（以一塊0.75/ 1.0/ 1.5 mm的膠為例）

1）取等體積分離膠緩沖液和分離膠溶液混勻，即取兩種溶液各2.0/ 2.7/ 4.0 mL。

2）往步驟1中的混合溶液中加入40/ 55/ 80 μL的改良型過硫酸銨溶液（凝固太快可減半過硫酸銨使用量），充分混勻。

3）將步驟2中的溶液注入制膠玻璃板中。注意加入分離膠后要在2 min內(nèi)將濃縮膠注入凝膠模具內(nèi)，且在灌注濃縮膠時(shí)要緩慢，防止?jié)饪s膠與分離膠混合在一起。如果個(gè)人覺得配置困難，也可改編為自行用乙醇封閉之后再進(jìn)行配置濃縮膠。

4）濃縮膠的配置：取等體積濃縮膠緩沖液和濃縮膠溶液混勻，即取兩種溶液各0.5/ 0.75/ 1.0 mL，然后加入10/ 15/ 20 μL的改良型過硫酸銨溶液，充分混勻。

5）注入制膠玻璃板中，插入梳齒（插膠梳時(shí)切勿用力過猛，輕輕插入）。

6）待15 min濃縮膠凝固后，拔去梳齒即可用于電泳。注：請盡量使用新鮮配置的電泳緩沖液。

 

注意事項(xiàng)

1. 建議電泳時(shí)電壓在100-120V之間，如需要加快電泳速度，可增加至150V。

2. 灌膠前，務(wù)必將凝膠溶液及緩沖液平衡到室溫（如室溫放置幾分鐘），可有效避免凝膠中氣泡的形成。

3. 過硫酸銨溶液（改良型）的使用量僅作參考，實(shí)際用量可根據(jù)個(gè)人實(shí)驗(yàn)習(xí)慣和經(jīng)驗(yàn)增加或減少。加入較多量的過硫酸銨可加快凝膠速度，反之亦然。PAGE凝膠的凝聚速度與溫度和過硫酸銨的用量密切相關(guān)。

4. 本產(chǎn)品已加入適量TEMED的替代品，如需進(jìn)一步加快凝膠速度，臨配膠前可按需補(bǔ)充適量TEMED。

5. 膠的凝固與溫度有顯著的正相關(guān)性。同等條件下，溫度越高，凝固速度越快。

6. 彩色濃縮膠在儲存過程中可能會產(chǎn)生少量沉淀，屬正常現(xiàn)象，請放心使用。使用前請輕柔混勻。

7. 改良型過硫酸銨溶液保存于-25~-15℃。為方便吸取使用，建議分裝保存，已開蓋使用中的過硫酸銨溶液可置于2~8℃保存。

8. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

9. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

附表1. 不同濃度SDS-PAGE分離膠參考分離范圍

SDS-PAGE分離膠濃度	最佳分離范圍（kDa）
8%凝膠	30-200
10%凝膠	20-80
12.5%凝膠	15-60
15%凝膠	10-45

 

Ver.CN20230620