產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格	價格/元	促銷價/元
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat) MaxUp 核糖體RNA去除試劑盒（人/小鼠/大鼠）	12253ES24	24 T	11363.00	10225.00
	12253ES96	96 T	37363.00	33625.00

 

產(chǎn)品描述

 

Hieff NGS^® MaxUp rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)利用RNase H消化法去除人、小鼠、大鼠總RNA中的核糖體RNA以保留信使RNA（mRNA）和其它非編碼RNA。該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。經(jīng)rRNA去除所獲得的RNA樣本可用于高通量測序分析mRNA和非編碼RNA，可顯著提高測序結(jié)果中有效數(shù)據(jù)比例，也可用于cDNA合成或其它下游應(yīng)用。

 

適用范圍

 

適用于人、小鼠、大鼠來源的100 ng~1 μg 總RNA樣品；適用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）樣品。

 

產(chǎn)品組分

 

 

運輸與保存方法

 

干冰運輸，-20°C存放。

有效期一年。

 

注意事項

 

1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZap^TM 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。

2. RNA樣品應(yīng)不含基因組DNA污染，若樣品中有gDNA殘留，應(yīng)先進行DNase I消化并純化后再用于本試劑盒。

3. RNA樣品最大投入體積為11 μL，若樣品體積較大，可先進行濃縮。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

自備材料

 

1. RNA純化磁珠：Hieff NGS^® Cleaner（Cat#12602）或其他等效產(chǎn)品。

2. qRT-PCR質(zhì)檢rRNA去除效率：Hieff^® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) （Cat#11201）或其他等效產(chǎn)品；

3. 其他材料： 無水乙醇、無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、磁力架、PCR儀等。

 

操作步驟

 

1. 探針雜交

1.1 將探針和雜交Buffer從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。

1.2 準備RNA樣品：根據(jù)投入量和樣品濃度，計算RNA取樣體積，用Nuclease free H₂O稀釋至11 μL。

1.3 按照表1于200 μL PCR管中配制rRNA去除反應(yīng)體系。

表 1 探針雜交反應(yīng)體系

名稱	體積（μL）
Hybridization Buffer	3
Probe Mix(H/M/R)	1
Total RNA	11（100 ng~1 μg）
Total	15

1.4 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

1.5 將上述 PCR 管置于PCR儀中，按照表2所示反應(yīng)程序，進行探針雜交反應(yīng)。

表 2 探針雜交反應(yīng)程序

溫度	時間
熱蓋105°C	On
95℃	2 min
95℃-22℃	0.1℃/s
22℃	5 min
4℃	hold

 

2. RNase H消化

 

2.1將RNase H消化試劑從-20 °C取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表 3 所示，配制RNase H消化反應(yīng)體系。

表3 RNase H消化反應(yīng)體系

名稱	體積（μL）
RNase H Buffer	3
RNase H	2
上步產(chǎn)物	15
Total	20

2.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

2.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)程序：熱蓋50℃；37℃，30 min； 4℃，hold，進行RNase H消化反應(yīng)。

3. DNase I 消化

3.1將DNase I消化試劑從-20 °C 取出，解凍后顛倒混勻，置于冰上備用。按照表4所示，配制DNase I消化反應(yīng)體系。

表4 DNase I消化反應(yīng)體系

名稱	體積（μL）
DNase I Buffer	27.5
DNase I	2.5
上步產(chǎn)物	20
Total	50

3.2 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

3.3 將上述 PCR 管置于PCR儀中，設(shè)置反應(yīng)程序：熱蓋50℃；37℃，30min； 4℃，hold，進行DNase I消化反應(yīng)。

4. RNA純化

4.1 準備工作：將 Hieff NGS^® RNA Cleaner （Cat#12602）磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少 30 min。用Nuclease free H₂O配制 80%乙醇。

4.2 渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證充分混勻。

4.3 吸取 110 μL Hieff NGS^® RNA Cleaner（2.2×，Beads:DNA=2.2:1）至上一步產(chǎn)物中，移液器充分吹打混勻，室溫孵育 5 min。

4.4 將PCR管置于磁力架中分離磁珠和液體，待溶液澄清后（約3 min），小心移除上清。

4.5 保持PCR管始終置于磁力架中，加入 200 μL Nuclease free H₂O新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育 30 sec 后，小心移除上清。

4.6 重復(fù)步驟 4.5，總計漂洗兩次。用 10 μL移液器吸干凈殘留液體。

4.7 保持 PCR 管始終置于磁力架中，室溫下開蓋干燥磁珠（5~10 min）。

4.8 RNA洗脫：將PCR 管從磁力架上取下，加入 11 μL Nuclease free H₂O（或使用適合下游實驗的相應(yīng)體積Nuclease free H₂O或洗脫緩沖液），使用移液器輕輕吹打至充分混勻，室溫靜置 5 min。

4.9將 PCR管短暫離心并置于磁力架中靜置，待溶液澄清后（約3 min），小心移取 10 μL 上清（可根據(jù)步驟4.8選擇的實際洗脫體積進行相應(yīng)調(diào)整）至新的Nuclease free PCR 管中。

【注】洗脫后的樣品請立即進行下游實驗，或置于-80℃存放。

 

案例展示

 

qPCR驗證: 以1μg 293T RNA進行rRNA去除，利用qPCR對比去除前后rRNA基因和mRNA基因的表達量變化。

HB210128