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            Mouse CD3+T Cell Isolation Kit(Negative Isolation) 小鼠CD3+T細胞分選試劑盒(陰選)

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            產(chǎn)品說明書

            FAQ

            COA

            已發(fā)表文獻

            產(chǎn)品簡介

             

            翌圣小鼠CD3+T細胞分選試劑盒(陰選)是通過陰性分選法從小鼠淋巴結(jié)、脾臟及其混合樣本中分離、純化CD3+T細胞。其原理是選用生物素(biotin)標記單克隆抗體Cocktail對非目標細胞(非CD3+T細胞)進行標記,而后通過鏈霉親和素(streptavidin)標記的磁珠對非目標細胞進行清除,從而得到無磁珠標記的小鼠CD3+T細胞。

             

            產(chǎn)品特點

             

            操作簡單:無需分選柱,使用磁性分離器即可實現(xiàn)目的細胞的分離。

            純度高:分選細胞純度可達95%以上;

            活性好:陰性分選,磁珠不與細胞直接接觸,分選后細胞無異常激活,不影響下游實驗。

            速度快:15分鐘即可分選得到目的細胞。

             

            產(chǎn)品信息

             

            編號

            組分名稱

            37653ES10(10 T)

            分選能力:Up to 108 cells 

            37653ES50(50 T)

            分選能力:Up to 108 cells 

            37653ES60(100 T)

            分選能力:Up to 109 cells 

            37653-A

            Mouse CD3+T Cell Negative Antibody Cocktail  

            20 μL

            100 μL

            200 μL

            37653-B

            Streptavidin Magnetic Beads

            0.2 mL

            1 mL

            2 mL

             

            儲存條件

             

            2~8℃保存,有效期1年,嚴禁凍存。

             

            使用說明

             

            1. 所需材料準備

            1)分離緩沖液:含有 2 mM EDTA和2%胎牛血清(FBS)的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS,需預(yù)先通過0.22 μm濾膜過濾除菌。

            2)分選材料和分離器無菌流式管或離心管,磁性分離器。

            1. 細胞分選,以分選小鼠脾臟CD3+T細胞為例:

            1)制備單細胞懸液:在70 μm細胞篩網(wǎng)上研磨脾臟,以預(yù)冷的PBS沖洗細胞篩網(wǎng),收集細胞懸液于50 mL離心管中,2000 rpm(500 g),離心5 min。

            2)離心結(jié)束,棄上清,加入5 mL紅細胞裂解液,吹打混勻,室溫裂解 5 min,再加入20 mL PBS終止反應(yīng),2000 rpm(500 g),離心5 min。

            注意:紅細胞裂解步驟可根據(jù)所用裂解液不同調(diào)整用量及時間。少量紅細胞殘留不會影響后續(xù)分選及細胞純度。 

            3)離心完成后,棄上清,將脾細胞重懸于PBS,細胞懸液用70 μm細胞篩網(wǎng)過濾后,計數(shù)。計數(shù)完成后,2000 rpm(500 g),離心 5 min。

            注意:細胞懸液需要過細胞篩網(wǎng),以除去組織和細胞團塊,否則會影響后續(xù)細胞分選純度。

            4)離心完成后,棄上清,將細胞重懸于分離緩沖液中,調(diào)整細胞密度為 1×108 cells/mL。

            5) 吸取100 μL細胞懸液(1×107 cells)加入無菌流式管底部,再加入2 μL Mouse CD3+T Cell Negative Antibody Cocktail(37653-A),混勻后 4°C孵育 10 min。

            注意:加入細胞懸液時將細胞加入流式管底部,避免沿流式管管壁加入。根據(jù)所使用磁力架不同也可使用離心管進行細胞分選。

            如果分選更多細胞,則按比例增加 Mouse CD3+T Cell Negative Antibody Cocktail(37653-A)的用量。 

            6)孵育完成后,在流式管中加入20 μL清洗過的Streptavidin Magnetic Beads37653-B, 混勻后 4°C 孵育10 min。

            注意:磁珠使用前需用分離緩沖液進行清洗:渦旋振蕩重懸磁珠,吸取實驗需要的磁珠至1.5 mL離心管,加入 1 mL分離緩沖液,10000 g 離心 1min,棄上清。加入 1 mL分離緩沖液重復洗滌磁珠1次后用與原來相同體積的分離緩沖液重懸磁珠。如吸取20 μL磁珠進行清洗,則清洗后用 20 μL 分離緩沖液進行重懸)。

            如果分選更多細胞,則按比例增加Streptavidin Magnetic Beads37653-B用量。

            如果分選少于 1×107 cells,則將細胞懸液體積補至 100 μL,加入 2 μL Mouse CD3+T Cell Negative Antibody Cocktail(37653-A)      20 μL Streptavidin Magnetic Beads37653-B。

            7)孵育完成后,在流式管中加入2.5 mL分離緩沖液,用移液器上下混合吹打5次混勻(避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻)。

            8)將含有細胞的分選流式管置于磁力架上,靜置 5 min。

            9)將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中(傾倒過程中流式管不要脫離磁力架),此細胞懸液中即包含純化的小鼠CD3 + T 細胞,2000 rpm(500 g),離心 5 min。離心后棄上清,收集細胞。

            10)根據(jù)實驗需要洗滌細胞后,將細胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中,即可用于后續(xù)分子生物學或細胞生物學實驗。

             

            注意事項

             

            1. Negative Antibody CocktailStreptavidin Magnetic Beads使用和保存過程中應(yīng)避免冷凍;

            2. 建議選用低吸附離心管和吸頭,避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗;

            3. 本產(chǎn)品需與磁性分離器配套使用;

            4. 本產(chǎn)品僅作科研用途!

            5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

             

            Ver.CN20250320

             

            400-6111-883