產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

FuniCut®系列內(nèi)切酶是通過(guò)基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FuniCut®系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡(jiǎn)化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過(guò)量或困難模板的酶切。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	15083ES60
規(guī)格	100 T
識(shí)別位置	5'-GGATG(N)9↓-3' 3'-CCTAC(N)13↓-5'
推薦反應(yīng)條件	1×FuniCut® 緩沖液；37°C孵育
酶活	5 U/μL
失活條件	80℃孵育20 min
同裂酶	BstF5I, BtsCI, BseGI

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱	15083ES60
15083-A	FuniCut® FokI	100 μL
15083-B	10×FuniCut® Buffer	1 mL
15083-C	10×FuniCut® Color Buffer*	1 mL

*10×FuniCut® Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。FuniCut® Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 對(duì)于被Dcm甲基化的DNA，剪切可能受阻。

2. 對(duì)于被CpG甲基化的DNA，剪切可能受阻。

3. 對(duì)于被EcoBI甲基化的DNA，剪切可能受阻。

4. 3 h孵育未表現(xiàn)星號(hào)活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。

5. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）

組分	質(zhì)粒DNA	PCR產(chǎn)物	基因組DNA
ddH2O	15 μL	16 μL	30 μL
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	3 μL*	5 μL
底物DNA	2 μL (~1 μg)	10 μL (~0.2 μg)	10 μL (5 μg)
FuniCut® FokI	1 μL	1 μL	5 μL
Total	20 μL	30 μL	50 μL

*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10×FuniCut® Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進(jìn)行克隆等實(shí)驗(yàn)，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。

2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴。

3) 37°C孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR產(chǎn)物），或30~60 min（基因組DNA）。

4) 80℃孵育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。

5) 如果使用FuniCut® Color Buffer進(jìn)行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可直接上樣電泳。

2. 雙酶切或多酶切

1) 每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系。

2) 所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的1/10。

3) 如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進(jìn)行孵育。

3. 質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系

組分	體積（20 μL）	體積（20 μL）	體積（50 μL）*
DNA	1 μg	2 μg	5 μg
10×FuniCut® Buffer或10×FuniCut® Color Buffer	2 μL	2 μL	5 μL
FuniCut® FokI	1 μL	2 μL	5 μL
Total	20 μL	20 μL	50 μL

*如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時(shí)間。

4. 不同DNA中的識(shí)別位點(diǎn)數(shù)

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
150	8	12	5	5	11	4	78

5. 甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無(wú)影響	剪切受影響	剪切受影響	無(wú)影響	剪切受影響

6. 不同反應(yīng)緩沖液中的活性*

反應(yīng)緩沖液	FuniCut® Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	50%	100%	50%

*活性數(shù)據(jù)來(lái)自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測(cè)。

 

Ver.CN20250206