產(chǎn)品簡介

 

RNase 抑制劑 (RNase inhibitor) 是存在于人的胎盤中一種特異性核糖核酸酶 (RNase) 抑制劑，其特異性失活 RNase 的原理是：與 RNase 以非共價鍵結(jié)合形成復(fù)合體，造成 RNase 失活。

本產(chǎn)品是以可溶形式在大腸桿菌中表達純化的重組鼠源 RNase 抑制劑，能夠廣泛抑制各種類型 RNase (RNase A, B, C)。 經(jīng) RT-PCR、RT-qPCR 檢驗，本產(chǎn)品能與各種逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA 聚合酶兼容。與人源 RNase inhibitor 相比，本產(chǎn)品不含人源蛋白中的兩個對氧化非常敏感的半胱氨酸，因而具有更高的抗氧化活性。同時，更加適合于對高 DTT 敏感性實驗，如 qPCR 等。

與 Murine RNase Inhibitor (40 U/µL) 鼠源 RNase 抑制劑 (Cat#10603ES) 相比，本品經(jīng)過翌圣生物 UCF.ME®超低殘留工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA等殘留更低，適合對背景菌要求更為嚴(yán)格、性能要求更高的應(yīng)用場景，如支持引物探針提前預(yù)混的熒光定量PCR體系的開發(fā)等。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	14676ES05 / 14676ES10 / 14676ES20 / 14676ES50 / 14676ES60 / 14676ES70
規(guī)格	2 KU / 10 KU / 20 KU / 40 KU /  100 KU / 400 KU
活性定義	抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定義為1 U。RNase A活性通過水解Cyclic 2’,3’-CMP生成3’-CMP定量求得。

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	14676ES05 (2 KU)	14676ES10 (10 KU)	14676ES20 (20 KU)	14676ES50 (40 KU)	14676ES60 (100 KU)	14676ES70 (400 KU)
14676	UCF.ME® Advanced Murine RNase Inhibitor (40 U/µL)	50 μL	250 μL	500 μL	1 mL	2.5 mL	10 mL

 

儲存條件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用說明

 

1. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）

組分	使用量
5×RT Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1 μL
UCF.ME® Advanced Murine RNase Inhibitor (40 U/µL)	1 μL
RNase free ddH2O	To 20 μL
模板RNA	Total RNA:1 ng-5 μg

2. 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置

溫度	時間
25℃*	5 min
42℃**	15-30 min
85℃***	5 min

*當(dāng)使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。

**逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-60℃。

***85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

3. 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng)，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
4. 適用機型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.

 

注意事項

 

1. 本品抑制 RNase 活性的 pH 值范圍較廣，在 pH 7-8 時表現(xiàn)最大活性。

2. 避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止本品失活。

3. 本品不抑制 RNase H 活性。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20241119