產(chǎn)品簡介

 

UDG（尿嘧啶-DNA 糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的 DNA 鏈中的尿嘧啶堿基與糖磷酸骨架間的 N-糖苷鍵，釋放游離的尿嘧啶。本酶可作用于含有 dU 的單鏈或雙鏈 DNA，對 RNA 無活性。

另外，UCF.ME® Advanced Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG) 經(jīng)過翌圣生物 UCF.ME®超低殘留工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA等殘留極低，適合對背景菌要求更為嚴(yán)格、性能要求更高的應(yīng)用場景，如支持引物探針提前預(yù)混的熒光定量PCR體系的開發(fā)等。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號	14468ES60 / 14468ES76 / 14468ES80 / 14468ES96
規(guī)格	500 U / 1000 U / 10000 U / 100000 U
活性定義	以25℃，30 min內(nèi)完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定義為1個(gè)活性單位（U）

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	14468ES60 (500 U)	14468ES76 (1000 U)	14468ES80 (10000 U)	14468ES96 (100000 U)
14468	UCF.ME® Advanced UDG/UNG, 10 U/μL	50 μL	100 μL	1 mL	10 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

 

1. 反應(yīng)體系（以25 μL和50 μL為例）

組分	體積 (μL)	終濃度
5×PCR Buffer (Mg2+ Plus)	10	1×
25 mM MgCl2	3	1.5 mM
dUTP (10 mM)	3*	0.6 mM
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each)	1	0.2 mM each
模板DNA	Optional	-
引物1 (10 μM)	2	0.4 μM
引物2 (10 μM)	2	0.4 μM
Taq DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5	0.05 U/μL
UCF.ME® Advanced UDG/UNG, 10 U/μL	0.1	1 U/50 μL
ddH2O	Up to 50

*根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，dUTP終濃度可在0.2-0.6 mM 之間調(diào)整?？蛇x擇性摻入0.2 mM dTTP。

 

2. 參考擴(kuò)增程序

反應(yīng)溫度	反應(yīng)時(shí)間	循環(huán)數(shù)	目的
25℃	10 min*	1	降解含U模板
94℃	2 min	1	UDG酶失活，模板預(yù)變性
95℃	10 sec	30-35	變性
60℃	20 sec		退火
72℃	30 sec		延伸
72℃	5 min	1	終延伸

*25℃反應(yīng)時(shí)間可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在5-10 min內(nèi)調(diào)整。

3. 適用機(jī)型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.

 

注意事項(xiàng)

 

1. 熱敏UDG在多數(shù)PCR反應(yīng)緩沖液中均有活性；

2. 酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；

3. 本產(chǎn)品僅做科研用途；

4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

 

 

Ver.CN20250102