產(chǎn)品簡介

 

本產(chǎn)品是一款采用公司自主研制的雙抗體進(jìn)行雙封閉的熱啟動(dòng)DNA聚合酶，不僅封閉了Taq DNA聚合酶5'→3'聚合酶活性，同時(shí)也封閉了5'→3'核酸外切酶活性。在預(yù)變性溫度下加熱30 sec封閉抗體即可完全失活，釋放出 DNA 聚合酶活性和核酸外切酶活性。雙封閉特性不僅能有效防止錯(cuò)配或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增，又能有效抑制探針降解產(chǎn)生的熒光信號(hào)下降，雙重保障使體外檢測試劑在運(yùn)輸或室溫使用過程中更加穩(wěn)定。

此外，該產(chǎn)品經(jīng)過翌圣生物 UCF.ME®超低殘留工藝處理，產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA等殘留極低，搭配優(yōu)化的緩沖體系（如 Cat#16715ES），可有效減少混樣、體系升溫階段以及長期儲(chǔ)存過程中引物探針互搭引起的非特異性擴(kuò)增，支持引物探針提前預(yù)混的熒光定量PCR體系的開發(fā)。

 

產(chǎn)品信息

 

貨號(hào)	14319ES76 / 14319ES80 / 14319ES92 / 14319ES93
規(guī)格	1000 U / 10000 U / 25000 U / 100000 U

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱	14319ES76 (1000 U)	14319ES80 (10000 U)	14319ES92 (25000 U)	14319ES93 (100000 U)
14319	UCF.ME® Advanced Hotstart E-Taq (20 U/μL)	50 μL	500 μL	1.25 mL	5 mL

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

 

1. 反應(yīng)體系（以25 μL和50 μL為例）

貨號(hào)	組分名稱	體積（μL）	體積（μL）
16715-A	5× PCR Buffer	5	10
16715-B	MgCl2（250 mM）	0.35	0.7
16715-C	dNTP Mix（25 mM each）	0.25	0.5
14319	UCF.ME® Advanced Hotstart E-Taq (20 U/μL)	0.15	0.3
/	Primer(10 μM)	0.4	0.8
/	Probe Mix (10 μM)	0.2	0.4
/	模板 DNA	1-20	1-30
/	RNase Free H2O	to 25μL	to 50 μL

【注】使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

a). dNTP濃度：建議dNTP終濃度為0.2 - 0.5 mM，如有特殊需求，可用25 mM each dNTP Mix以0.05 - 0.1 mM為間隔上下摸索dNTP的最佳使用濃度。

b). MgCl₂濃度： 建議Mg 2+終濃度為1.5 - 5 mM，如有特殊需求，可用250 mM MgCl₂以0.2 - 0.5 mM為間隔上下摸索Mg 2+的最佳使用濃度。

c). 引物濃度：Primer Mix 中包含多對引物，通常每條引物終濃度可以根據(jù)情況在 0.1-1.0 μM 間進(jìn)行調(diào)整。

d). 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號(hào)的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。

e). 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。

f). 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

g). 體系配制：請于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭；避免交叉污染和氣溶膠污染。

2. 參考擴(kuò)增程序

2.1 標(biāo)準(zhǔn)程序

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	5 min	1
變性 退火/延伸	95℃	15 sec	45
	60℃a	30 secb

【注】a. 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。

b. 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。

2.2 快速程序

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	95℃	30 sec	1
變性 退火/延伸	95℃	5 sec	45
	60℃	20 secc

【注】c. 快速程序：實(shí)際使用的qPCR檢測儀器是否支持快速擴(kuò)增，請進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。

3. 適用機(jī)型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR; SLAN 96S, 96P.

 

注意事項(xiàng)

 

1. 實(shí)驗(yàn)過程中請使用RNase free耗材。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20241119