產品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻
產品簡介
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) 是2×實時定量PCR擴增的預溶液，具有熒光強度高，靈敏度高和特異性強，擴增產量高等特點。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動，可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導致的非特異性擴增。同時配方添加了提升PCR反應擴增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴增的促進因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內獲得良好的線性關系。該產品利用不同染料的混合變色反應來監(jiān)控移液操作，有效降低了移液誤差的發(fā)生。
組分信息
|
組分編號 |
組分名稱 |
11190ES03 |
11190ES08 |
11190ES60 |
|
11190-A |
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
1 mL |
5×1 mL |
100×1 mL |
|
11190-B |
10×Dilution Buffer |
1 mL |
1 mL |
20×1 mL |
儲存條件
-25~-15℃避光保存，有效期1年。
使用說明
- Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix 中包含藍色染料，10×Dilution Buffer為專用黃色濃縮模板稀釋液。使用過程中，如需要進行模板示蹤，則需稀釋到1X作為模板稀釋液使用，然后進行qPCR檢測；如不需要進行模板示蹤，則不使用Dilution Buffer即可。
|
模板類型 |
10×Dilution Buffer使用方式* |
Dilution Buffer 終濃度 |
|
cDNA溶液、已溶解的質粒、基因組 |
若要稀釋模板，則先使用無菌超純水將模板稀釋至目標濃度，后在每9 μL模板中加入1 μL 10×Dilution Buffer。 |
1× |
|
未溶解的DNA粉末 |
使用無菌超純水將10×Dilution Buffer 稀釋至1×，使用合適體積的1×Dilution Buffer作溶劑溶解對應的DNA粉末。 |
1× |
*實際使用過程中也可按需使用其他方案，保證最終模板中Dilution Buffer濃度為1×即可。
- 推薦qPCR反應體系
|
組分 |
體積 （μL）*** |
體積 （μL）*** |
終濃度 |
|
Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox) |
25 |
10 |
1× |
|
Forward Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
Reverse Primer (10 μM)* |
1 |
0.4 |
0.2 μM |
|
模板DNA/cDNA** |
x |
x |
- |
|
無菌超純水 |
Up to 50 |
Up to 20 |
- |
*通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-1.0 μM之間進行調整。
**如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10，最佳模板加入量以保證擴增得到的Ct值在20-30個循環(huán)為宜。
***推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性；上機前需充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
- 反應程序
|
循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數 |
|
預變性 |
95℃ |
2 min |
1 |
|
變性 |
95℃ |
10 sec |
40 |
|
退火/延伸* |
60℃ |
30 sec** |
|
|
熔解曲線階段* |
儀器默認設置 |
1 |
|
*退火溫度和時間：請根據引物TM值和目的基因的長度進行調整。
**熒光信號采集：請勿忘記打開熒光信號采集，按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置。
***熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認程序。
適用機型
本產品中預混了用以校正孔與孔之間熒光信號誤差的ROX Reference Dye 1 (高濃度)，適用于以下熒光定量PCR儀：Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus;以及其他需要添加高濃度ROX Reference Dye的熒光定量PCR儀。
引物設計指南
- 推薦引物長度25 bp左右。擴增產物長度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內選擇。
- 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
- 引物堿基分布均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。
- 引物內部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個堿基以上的互補序列。
- 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物 3’端有2個堿基以上的非特異性互補。
- 設計完成的引物需要進行擴增效率的檢測，只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。
注意事項
- 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
- 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
- 使用前請上下顛倒以混勻Master Mix，請勿vortex避免產生氣泡，影響定量結果。Master Mix經混勻短暫離心后即可使用。加樣過程中吹打要輕，如果操作不慎Master Mix起泡，需再次離心方可使用。
- 由于本品檢測靈敏度極高，易被空氣中氣溶膠污染。因此反應體系配制時請于超凈工作臺內進行，配制過程中請使用滅菌槍頭、反應管，條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍和帶濾芯的槍頭。
- 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號：11155ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
- 本產品僅作科研用途！
Ver.CN20241016
推薦商品
