產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品簡介
MolPure® Mag96 Plasmid Mini Kit（Prepackaged）磁珠法96孔質(zhì)粒小量提取試劑盒（預封裝）采用堿裂解法裂解細胞，通過獨特的磁珠和精心優(yōu)化的緩沖體系從菌體中提取純化高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA ，提取過程中不需要用到有毒的酚氯仿等有機物。本試劑盒適用于提取1-5 mL過夜培養(yǎng)的大腸桿菌，質(zhì)粒提取得率和質(zhì)量與質(zhì)?？截悢?shù)、宿主菌種類以及細菌培養(yǎng)條件等因素相關(guān)。從2 mL過夜培養(yǎng)的菌液中一般能夠獲得8-12 μg的高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。本試劑盒提取到的質(zhì)粒DNA可直接用于后續(xù)酶切、轉(zhuǎn)化和測序等實驗。
組分信息
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類別 |
組分編號 |
組分名稱 |
18541ES96 |
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PartⅠ |
18541-A |
RNase A |
250 μL |
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PartⅡ |
18541-B |
Buffer P1 |
24 mL |
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18541-C |
Buffer P2 |
24 mL |
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18541-D |
Buffer P3 |
24 mL |
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18541-E |
結(jié)合板 |
1塊×1 |
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18541-F |
漂洗板 |
1塊×1 |
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18541-G |
磁珠+洗滌板 |
1塊×1 |
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18541-H |
洗滌板 |
1塊×1 |
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18541-I |
洗脫板 |
1塊×1 |
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18541-J |
96深孔磁棒套 |
1塊/包×1 |
儲存條件
1.PartⅠ冰袋運輸，-25~-15℃ 保存，有效期2年；
2.PartⅡ室溫運輸，室溫保存，有效期18個月。
注意事項
- 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
- Buffer P2 和 Buffer P3 中含有刺激性物質(zhì)，操作過程中應(yīng)穿上實驗服，戴好乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮膚或眼睛后，請立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)生的幫助。
- 本產(chǎn)品僅作科研用途！
實驗前準備
- 自備儀器與試劑：臺式離心機、小型離心機、渦旋振蕩儀、96通道核酸提取儀。
- 首次使用前，將 RNase A (18541-A)全部加入到Buffer P1（18541-B）瓶中，充分混勻后使用，并做好標記，儲存于2-8℃。
- 使用前請檢查Buffer P2 (18541-C)是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請于37℃水浴重新溶解。
操作方法
- 樣本預處理：
- 從新鮮培養(yǎng)的平板中挑取一個單克隆菌落，接種到含對應(yīng)抗生素的 LB 培養(yǎng)基中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng) 12-16 h。
【注】：細菌培養(yǎng)時間不應(yīng)超過 16 h。培養(yǎng)時間超過 16 h的細菌開始出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，可能導致質(zhì)粒 DNA 的得率降低。
【注】：用于細菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基所占容器的體積不應(yīng)大于 1/4。
【注】：長時間儲存的甘油菌中的細菌可能已經(jīng)出現(xiàn)細菌個體間基因型的分化，并混有丟失質(zhì)粒的細菌。甘油菌必須在含有抗生素的平板上劃線篩選，挑選生長良好的單菌落用于接種培養(yǎng)。
- 取 1-5 mL 過夜培養(yǎng)的菌液，12,000 rpm 離心 1 min，吸棄上清液，收集菌體沉淀。
【注】：菌液較多時，可通過多次離心將菌體沉淀收集在一個離心管中。
- 向菌體沉淀中加入 250 µL Buffer P1，吹打或渦旋重懸菌體沉淀。
【注】：確保菌體徹底重懸，否則影響得率和質(zhì)量。
【注】：確保Buffer P1中已添加 RNase A。
- 加入 250 µL Buffer P2，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次以充分裂解菌體。
【注】：使用 Buffer P2 前確認溶液中沒有沉淀存在；Buffer P2 使用完后應(yīng)蓋緊瓶蓋，避免與空氣長期接觸。
【注】：裂解時間與菌量相關(guān)，當細菌裂解充分時，溶液應(yīng)呈粘稠的透明狀；如果達不到上述效果，可能是細菌用量過多所致，可增加
翻轉(zhuǎn)的次數(shù)以達到粘稠的透明狀,此步驟最長不能超過5 min。
【注】：此步驟不可用旋渦振蕩器混勻，否則將導致最后制備的質(zhì)粒中混有基因組 DNA。
- 加入 250 µL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次充分混勻，此時將出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12,000 rpm 室溫離心 10 min ，小心地將吸取 700 μL上清液至新的1.5 mL離心管中，此為樣本預處理液。
- 自動化提?。?/font>
- 從試劑盒中取出預裝板，正反顛倒數(shù)次使磁珠重懸，輕甩孔板使試劑和磁珠都集中到孔板底部，小心撕去預裝板封膜。
- 小心地吸取樣本預處理液至結(jié)合板（18541-E）。
- 將預裝板正確安放在核酸提取儀中，并正確安裝磁棒套。
- 運行如下程序，程序結(jié)束后，將洗脫得到的核酸溶液（18541-I，洗脫板）轉(zhuǎn)移至新的離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長期保存。
翌圣96通道自動化核酸提取儀AP-96N提取程序
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步驟 |
第1步 |
第2步 |
第3步 |
第4步 |
第5步 |
第6步 |
第7步 |
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板位 |
3 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
3 |
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等待時間 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:00:00 |
00:04:00 |
00:00:00 |
|
混合模式 |
M1 |
M3 |
M3 |
M2 |
M2 |
M3 |
M1 |
|
混合時間 |
00:00:12 |
00:05:00 |
00:02:00 |
00:01:30 |
00:01:00 |
00:06:00 |
00:00:12 |
|
是否暫停 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
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吸磁時間 |
00:00:30 |
00:01:20 |
00:00:30 |
00:00:30 |
00:00:30 |
00:01:20 |
00:00:00 |
|
體積 |
500 μL |
1000 μL |
500 μL |
500 μL |
500 μL |
70 μL |
500 μL |
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溫度 |
- |
- |
- |
- |
- |
65 ℃ |
- |
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混合模式 |
M1 |
混合時間10 s，混合速度100000 |
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混合模式 |
M2 |
混合時間10 s，混合速度200000 |
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混合模式 |
M3 |
混合時間10 s，混合速度300000 |
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Ver.CN20240729
