Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2
CUT&Tag試劑盒（pA/G-Tn5版）

樣本即用型試劑盒：含CUT&Tag實(shí)驗(yàn)中除樣本和一抗和蛋白酶抑制劑以外的所有試劑，無(wú)需額外其他組分

 

產(chǎn)品應(yīng)用

蛋白質(zhì)-DNA互作研究：組蛋白修飾調(diào)控、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控等表觀(guān)作用機(jī)制研究

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

 

●含兩種純化磁珠：針對(duì)小片段純化，回收效果更好。

●實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)周期短：建庫(kù)一步法，節(jié)省建庫(kù)時(shí)間；ConA使用，無(wú)需離心轉(zhuǎn)管；無(wú)需超聲片段化；樣本投入量低。

●實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好

產(chǎn)品描述

 

Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2 是針對(duì)Illumina^®高通量測(cè)序平臺(tái)研發(fā)的用于CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的文庫(kù)構(gòu)建試劑盒，適用于100-100,000個(gè)細(xì)胞起始量的樣本建庫(kù)。CUT&Tag是研究蛋白與DNA互作的技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的ChIP-seq、CUT&RUN，該技術(shù)具有文庫(kù)構(gòu)建時(shí)長(zhǎng)更短（僅需7小時(shí)）、操作更簡(jiǎn)單、對(duì)起始樣本要求更低、抗體投入量更少、文庫(kù)產(chǎn)量更高等優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)過(guò)細(xì)胞捕獲、一抗孵育、二抗孵育、轉(zhuǎn)座酶孵育、轉(zhuǎn)座酶激活、摻入DNA標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞裂解、磁珠回收gDNA、文庫(kù)擴(kuò)增和磁珠分選等步驟，靶蛋白結(jié)合的DNA片段最終轉(zhuǎn)化為適用于Illumina^®平臺(tái)測(cè)序的文庫(kù)。

本試劑盒包含兩個(gè)獨(dú)立模塊：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含結(jié)合細(xì)胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文庫(kù)純化的DNA Selection Beads，BOX-II包含細(xì)胞透化劑、抗體結(jié)合buffer、轉(zhuǎn)座酶結(jié)合buffer、蛋白酶K以及后續(xù)文庫(kù)擴(kuò)增所需的所有試劑。此外，本試劑盒已在不同種類(lèi)細(xì)胞（如293T、K562、CHO、ESC細(xì)胞等）中進(jìn)行了驗(yàn)證，均具有良好的建庫(kù)效率和建庫(kù)產(chǎn)量。本試劑盒提供的所有試劑都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫(kù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

 

圖  Qsep對(duì)不同細(xì)胞投入量文庫(kù)質(zhì)量分析：不同樣本投入，CUT&Tag實(shí)驗(yàn)都能得到一致的結(jié)果

 

圖：spike in 讓數(shù)據(jù)分析結(jié)果更真實(shí)：Spike in校正后，不同投入量的樣本，基因富集倍率更真實(shí)、更準(zhǔn)確。
 

組分信息

 

組分編號(hào)			組分名稱(chēng)	12597ES04	12597ES12	12597ES48
BOX-I	12597-A	⇔	ConA Beads	40 μL	120 μL	480 μL
	12597-B	⇔	DNA Extract Beads	280 μL	840 μL	3.36 mL
	12597-C	⇔	DNA Selection Beads	400 μL	1.2 mL	4.8 mL
BOX-II	12597-D	⇔	10 × Binding Buffer	120 μL	360 μL	1.44 mL
	12597-E	⇔	10 × Wash Buffer	600 μL	1.8 mL	7.2 mL
	12597-F	⇔	5% Digitonin	45 μL	135 μL	540 μL
	12597-G	⇔	50 × PB Buffer	6 μL	18 μL	72 μL
	12597-H	⇔	10 × Dig-300 Buffer	400 μL	1.2 mL	4.8 mL
	12597-I	⇔	pA/G-Transposome Mix	8 μL	24 μL	96 μL
	12597-J	⇔	33× Activating Buffer	6 μL	18 μL	72 μL
	12597-K	⇔	15 × Terminate Solution	20 μL	60 μL	240 μL
	12597-L	⇔	30 × Proteinase K	10 μL	30 μL	120 μL
	12597-M	⇔	DNA Spike-in Mix (5 ng/μL)	4 μL	12 μL	48 μL
	12597-N	⇔	2×HiFi Amplification Mix	100 μL	300 μL	1.2 mL
	12597-O	⇔	Goat Anti-Rabbit lgG(H+L)*	2 μL	6 μL	24 μL
	12597-P	⇔	N5 (N501)**	4 μL	/	/
	12597-Q	⇔	N7 (N701)**	4 μL	/	/

注意：*本試劑盒中包含的二抗為山羊抗兔二抗，適用于使用一抗來(lái)源于兔源的研究，若需要一抗來(lái)源于鼠源的研究，需客戶(hù)自行準(zhǔn)備抗鼠二抗（Yeasen cat#34851ES）或其他等效產(chǎn)品。

**測(cè)序時(shí) Index 序列 填寫(xiě)時(shí)，測(cè)序平臺(tái)為NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500，則N501-CTCTCTAT，N701-TAAGGCGA。測(cè)序平臺(tái)為NovaSeq 6000 v1.5 reagents，MiniSeq, NextSeq,HiSeq 3000/4000，則N501-ATAGAGAG，N701-TAAGGCGA。

***本試劑盒在實(shí)驗(yàn)前需自備蛋白酶抑制劑Cocktail（Yeasen Cat#20123ES）或其他等效產(chǎn)品。

 

存儲(chǔ)條件

 

BOX-I：2-8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。