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            RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)貼壁細胞培養(yǎng)全攻略

            RAW264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)屬貼壁細胞,大家細胞總是養(yǎng)不好、消化傳代困難,實驗數(shù)據(jù)不理想的罪魁禍首。除此之外,細胞生長緩慢、貼壁困難,也是大家在培養(yǎng)細胞過程中出現(xiàn)的最常見問題,今天小翌就來給大家整理一份RAW264.7細胞培養(yǎng)全攻略?。?!

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            ▲ 圖源Pixabay

             

            Part Ⅰ
             概 述
             
            RAW264.7中文全名為小鼠單核巨噬細胞白血病細胞,來源于雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤,是常用的炎癥細胞模型之一,常見于研究細胞吞噬、細胞免疫、分子免疫學(xué)。
            Part Ⅱ
             細胞的形態(tài)與特點
             

            RAW264.7細胞具有強吞噬能力,細胞在吞噬抗原后釋放趨化因子,促使細胞分化出偽足,因此造成細胞極難消化。細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都易促使細胞呈現(xiàn)梭形,造成最終實驗數(shù)據(jù)不理想。

            有時細胞看起來一切正常,但卻生長緩慢,究其原因多半是感染了支原體,支原體感染導(dǎo)致生長變慢、狀態(tài)變差,雖不會馬上致死,但會影響其機體內(nèi)的各種參數(shù),且難以被觀察到,是影響細胞狀態(tài)的隱形殺手。

            Part Ⅲ
             針對性解決方案
             

            在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種:1.復(fù)蘇不易成功2.細胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細胞生長緩慢,當你的細胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸,不妨試一試以下幾種解決辦法。

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            復(fù)蘇難以成功

            原因:RAW264.7對空間十分敏感,復(fù)蘇密度太高,細胞增殖太快,加劇細胞營養(yǎng)缺失,加速細胞老化。

            解決辦法:T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細胞數(shù)量控制在104~105

            2

            細胞變異明顯

            原因:細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形

            解決辦法:改善細胞培養(yǎng)環(huán)境,例如與細胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌,換flask培養(yǎng)瓶,采用一次性器具,使用質(zhì)量較高的胎牛血清

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            消化困難

            原因:細胞老化后,細胞偽足多且長,使細胞難消化,使用胰酶或細胞刮會對細胞損傷較大

            解決辦法:無需胰酶使用吸管重復(fù)吹打,可消化大部分正常狀態(tài)的細胞;但若細胞為“長腳”狀態(tài),即使加入胰酶消化超過10min,也難以消化下來,勉強消化,對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也有較大影響。

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            生長緩慢

            原因:支原體污染會導(dǎo)致細胞生長緩慢,甚至難以貼壁

            解決辦法:定期進行支原體檢測(
            如翌圣生物一步法恒溫支原體檢測試劑),如發(fā)現(xiàn)支原體污染,即刻使用支原體去除試劑(如翌圣生物MycAwayTM 支原體去除試劑

            Part Ⅳ
             精品推薦
             
              Yeasen 40612 要一步法即可檢測支原體的存在
            Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用獨有的等溫擴增技術(shù),在顏色判別方面具有更強的辨識度,由藍紫色(陰性)向天藍色陽性)的變,更利于肉眼的判別,增加了防污染組分,杜絕假陽性現(xiàn)象的存在。

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            ▲ 圖1.一步法支原體檢測操作流程

              結(jié)果是陽性,別怕!Yeasen 40607 幫你搞定
            MycAwayTM 支原體去除試劑(1000×)是一種混合制劑,可通過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細胞無傷害,最大程度上挽救您的細胞,減少因支原體污染帶來的損失。
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            去除前
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            去除后

            ▲ 圖2.Yeasen MycAwayTM 支原體去除效果的展示

             

              支原體去除試劑的特點

            » 毒性低:對細胞毒性小,不影響后續(xù)細胞實驗,如細胞活力檢測和細胞轉(zhuǎn)染等;

            » 穩(wěn)定性強:-20℃試劑能較長時間保存并保持高效用;

            » 操作簡單:只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可;

            » 起效快:最快3天即可見效;

            » 去除范圍廣:能去除實驗室絕大多數(shù)支原體類型。          
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            ▲ 圖3.支原體去除試劑細胞毒性檢測圖示

             

            Part Ⅴ
             相關(guān)產(chǎn)品
             

            限時線下促銷正在進行,詳情請咨詢當?shù)劁N售

            類別

            產(chǎn)品

            貨號

            規(guī)格

            支原體檢測

            GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit   GMyc-PCR支原體檢測試劑盒

            40601ES10/20

            10/20 assays

            MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒

            40612ES25/60

            25/100T

            支原體
            去除試劑

            MycAway™ Spray (Ready-to-use)  支原體噴霧劑(即用型)

            40605ES02/03

            1 / 2×500 mL

            MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent  MycAway™ 支原體去除試劑(1000×

            40607ES03/08

            1/ 5×1mL

            支原體
            預(yù)防試劑

            MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原體預(yù)防試劑(2000×

            40608ES03/08

            1/5×1 mL

            MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士

            40609ES60

            100 mL

            MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 

            水浴鍋2號消毒衛(wèi)士

            40610ES60

            100 mL


            最后就是小翌發(fā)福利的時候啦,關(guān)注翌圣公眾號,回復(fù)消息支原體即可免費領(lǐng)取支原體檢測試劑試用裝哦,趕緊行動吧!
             

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